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Doctoral Thesis
DOI
10.11606/T.64.2008.tde-12092008-094829
Document
Author
Full name
Othon Silva Abrahão
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Piracicaba, 2008
Supervisor
Committee
Mui, Tsai Siu (President)
Cristofani, Mariangela
Geraldi, Isaias Olivio
Maccheroni Junior, Walter
Zucchi, Maria Imaculada
Title in Portuguese
Rastreabilidade de soja Roundup Ready® em produtos agrícolas e derivados: produção de materiais de referência e uso de marcadores AFLP
Keywords in Portuguese
Detecção de transgênicos
Qualidade de alimentos
Quantificação de OGM
Soja RR
Abstract in Portuguese
A introdução de variedades transgênicas de soja provocou grandes alterações no mercado mundial e na legislação de países produtores e compradores, principalmente no que se refere à certificação, rastreabilidade, biossegurança e rotulagem. A soja é responsável por quase metade das receitas com exportação do Brasil, estando presente na forma de matéria-prima ou ingrediente em parte significativa dos alimentos no mercado brasileiro. O limite estabelecido de 1,0 % para presença de transgênicos em alimentos, acima do qual a rotulagem passa a ser obrigatória, gerou a demanda por materiais de referência para controle e quantificação em matérias-primas e alimentos, para harmonização e uniformização dos resultados obtidos em diferentes equipamentos e laboratórios, atualmente produzidos com exclusividade pelo Instituto de Materiais de Referência e Medidas - IRMM, na Bélgica. Diante do alto custo e da dificuldade de obtenção destes produtos, foram elaborados, utilizando-se técnica de moagem e mistura criogênica, com verificação por PCR em tempo real, candidatos a materiais de referência para soja transgênica Roundup Ready® (soja RR) em pó nas concentrações de 0%, 0,1%, 0,5%, 1,0%, 2,0% e 5% de material transgênico. Para rastrear a origem da soja transgênica, aplicou-se o método de marcadores AFLP sobre 29 variedades de soja RR, sendo 21 argentinas e 8 brasileiras, encontrando-se 6 bandas polimórficas, produtos de 4 pares de primers, selecionados de um total de 67 reações usando diferentes combinações de primers seletivos. Por este método, foram caracterizadas 15 das variedades argentinas e todas as variedades brasileiras. Para alimentos processados em análise de PCR, adotou-se a estratégia de detecção de fragmentos curtos (cerca de 100 pb) de soja RR, com desenho de primers usando programas computacionais de livre acesso na Internet (Primer3, NetPrimer, Rebase) e validação por digestão com endonucleases e sequenciamento. Foram estabelecidos dois novos conjuntos de primers para detecção e quantificação de fragmentos dos genes da lectina e CP4 EPSPS de soja RR, testados nas 29 variedades de soja RR e três matrizes de alimentos à base de soja
Title in English
Roundup Ready® transgenic soybean traceability in agrifood products and derivatives: reference materials production and the use of AFLP markers
Keywords in English
Food quality
GMO quantification
RR soybean
Transgenic detection
Abstract in English
The introduction of soybean transgenic cultivars brought several changes in both world trade and regulation rules for producers and consumers, mainly in relation to certification, traceability, biosafety and labeling. Soybean is one of the largest commodities in the world trade and responsible for half of the Brazilian export incomings, present as raw material or ingredient in significant part of foods in the local market. The adoption of the threshold of 1,0 % for nonintentional presence of GMO in food, requiring obligatory labeling for contents above this level, demands reference materials for the control and quantification of transgenics in raw material and processed food, allowing the harmonization of results from different methods and laboratories, currently being produced exclusively by the Institute for Reference Materials and Measurements - IRMM, in Belgium. Due to the high costs and difficulty to obtain these products, candidate reference materials of Roundup Ready® transgenic soybean (RR soybean) were produced at levels of 0 %, 0,1 %, 0,5 %, 1,0 %, 2,0 % and 5,0 % of transgenic material, using cryogenic milling and mixing techniques, with subsequent verification by real time PCR. Tracing of Roundup Ready cultivars by origin was done through AFLP molecular markers in a total of 29 RR soybean cultivars: 21 Argentinean and 8 Brazilian cultivars. Fingerprinting was possible in 15 Argentinean and all Brazilian cultivars through 6 bands obtained from 4 selective pairs of primers, singled out from 67 different combinations of selective primers. For PCR analysis of processed food, primers were designed using freeware sources over the Internet (Primer3, NetPrimer, Rebase) for short fragments amplification (around 100 bp). Primers sets for the amplification of lectin and CP4 EPSPS gene fragments from RR soybean were designed for the detection of these genes in the 29 RR soybean cultivars and three soybean based food matrices, with the results validated by endonucleases digestion and sequencing
 
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Doutorado.pdf (3.41 Mbytes)
Publishing Date
2008-09-19
 
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