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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.58.2018.tde-26092016-160148
Documento
Autor
Nome completo
Milena Suemi Irie
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2016
Orientador
Banca examinadora
Taba Junior, Mario (Presidente)
Faccioli, Lucia Helena
Nagata, Maria José Hitomi
Soares, Priscilla Barbosa Ferreira
Título em português
Análise do potencial osteogênico e angiogênico do tecido pulpar fresco em associação às proteínas derivadas da matriz do esmalte através da expressão gênica e proteica
Palavras-chave em português
Fatores de crescimento
Polpa dentária
Terapia tecidual
Resumo em português
A regeneração óssea é um processo complexo que exige a atuação coordenada de vários sinalizadores bioquímicos para promover as diversas fases da angiogênese e osteogênese. Diversas pesquisas têm focado no entendimento da biologia molecular com o objetivo de promover e acelerar a regeneração do tecido ósseo. Este estudo avaliou o potencial osteogênico e angiogênico da polpa dentária (PD) fresca e o efeito das proteínas derivadas da matriz do esmalte (EMD) neste tecido, obtido imediatamente após a exodontia, sem isolamento e cultura destas células. Trinta e seis amostras foram utilizadas, cada uma constistuída de um pool de tecidos da polpa removidos de 2 dentes de um mesmo paciente. No grupo controle, as amostras foram inseridas em criotubo e mantidas por 20 minutos em temperatura ambiente. No grupo teste, foi realizada aplicação de EMD (Emdogain®) na proporção de 1:1 e também mantidas por 20 minutos em temperatura ambiente. Análise de expressão gênica de Runx2, Osterix, ALP, BSP, OPN, VEGF-A, FGF-2 foi realizada através da Reação da Transcriptase Reversa em Cadeia da Polimerase (qRT-PCR). As análises imunológicas foram realizadas pelo imunoensaio Multiplex Cytokine Profiling (Luminex) para níveis de OCN, OPN, EGF, Angiopoietina-2, BMP-9, FGF-1, FGF-2, VEGF-A, VEGFC, VEGF-D. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente. Os genes BSP e OPN apresentaram níveis significativamente maiores (p < 0,05) no Grupo Controle. Em relação à Osterix e FGF-2, houve maior expressão (p < 0.05) no Grupo Teste. Nos genes Runx-2, ALP e VEGF-A, não foi possível observar diferenças significativas entre os grupos. Na análise imunológica, OCN e OPN apresentaram níveis significativamente maiores (p < 0,05) no Grupo Controle. Já os níveis de Angiopoietin-2, BMP-9, FGF-1, VEGF-C, VEGF-D, VEGFA e FGF-2 tiveram maior expressão (p < 0,05) no Grupo Teste. Para os níveis de EGF, não foi observada diferença estatística (p < 0,05) entre os grupos. De acordo com os achados deste estudo, a aplicação de EMD no tecido pulpar em modelo ex vivo, aumentou a expressão gênica e proteica relacionada ao processo angiogênico, podendo, portanto, favorecer a regeneração óssea. No entanto, ensaios clínicos são necessários para confirmar os achados deste estudo e para que esta proposta terapêutica seja validada.
Título em inglês
Osteogenic and angiogenic potential of dental pulp tissue in association with enamel matrix derivative
Palavras-chave em inglês
Dental pulp
Growth factors
Tissue therapy
Resumo em inglês
Bone regeneration is a complex process that requires coordinated biochemical signaling to promote the various stages of angiogenesis and osteogenesis. In order to promote and accelerate bone regeneration, many studies have focused on molecular biology knowledge of this process. This in vitro study investigated the angiogenic and osteogenic potential of fresh dental pulp tissue with or without enamel matrix derivative (EMD) stimulation through gene and protein expression. Thirty-six samples were obtained, each one composed by a pool of pulp tissue removed from 2 teeth of the same patient. In the control group, immediately after tooth extraction, dental pulp tissue was collected and inserted in cryotube and left 20 minutes at room temperature. In the test group, EMD was applied and left 20 minutes at room temperature. Gene expression of Runx2, Osterix, ALP, BSP, OPN, VEGF-A, FGF-2 was assessed by qRT-PCR. Immunological analysis of OCN, OPN, EGF, Angiopoietin-2, BMP-9, FGF-1, FGF-2, VEGF-A, VEGF-C and VEGF-D levels was performed by Multiplex Cytokine Profiling (Luminex). Test Group presented significantly lower mean levels of BSP and OPN than Control Group (p<0,05). Osterix and FGF-2 mean levels were higher (p<0,05) in Test Group than Control Group. Immunological analyisis showed that OCN and OPN mean levels were significant lower in Test Group (p<0,05). However, Test Group presented significantly higher mean levels of ANGIOPOIETINA-2 BMP-9, FGF-1, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-A (p<0,05). EMD application in dental pulp tissue in ex vivo model increased gene and protein expression related to angiogenesis and can actuate in bone regeneration process. However, randomized clinical trials are required to confirm our findings and to validate this therapy approach.
 
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Data de Publicação
2018-09-12
 
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