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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.5.2009.tde-28042009-160308
Documento
Autor
Nome completo
Letícia Ferreira Gontijo Silveira
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2009
Orientador
Banca examinadora
Xavier, Ana Claudia Latrônico (Presidente)
Bachega, Tânia Aparecida Sartori Sanchez
Borella, Maria Ines
Toledo, Sergio Pereira de Almeida
Vieira, Teresa Cristina Alfinito
Título em português
Análise do gene KISS1 nos distúrbios puberais humanos
Palavras-chave em português
Gonadotropinas
Hipogonadismo
Hormônio liberador de gonadotropina
Mutação
Proteínas supressoras de tumor
Puberdade precoce
Sistema hipotálamo-hipofisário
Resumo em português
A kisspeptina, codificada pelo gene KISS1, é um neuropeptídeo crucial na regulação do início da puberdade. A kisspeptina estimula a secreção hipotalâmica do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) após se ligar ao seu receptor GPR54. Mutações inativadoras do GPR54 são atualmente consideradas como uma causa rara de hipogonadismo hipogonadotrófico isolado (HHI) normósmico. Recentemente, uma mutação ativadora no receptor GPR54 foi implicada na patogênese da puberdade precoce dependente de gonadotrofinas (PPDG). Com base nesses achados, levantamos a hipótese de que alterações no gene KISS1 poderiam contribuir para a patogênese de distúrbios puberais centrais. O objetivo do presente estudo foi investigar a presença de variantes no gene KISS1 em pacientes com PPDG e HHI. Sessenta e sete crianças brasileiras com PPDG (63 meninas e 4 meninos) e 61 pacientes com HHI (40 homens e 21 mulheres) foram selecionados, incluindo casos esporádicos e familiares em ambos os grupos. A população controle consistiu de 200 indivíduos com história de desenvolvimento puberal normal. A região promotora e os 3 exons do gene KISS1 foram amplificados e submetidos a sequenciamento automático. Duas novas variantes no gene KISS1, p.P74S e p.H90D, foram identificadas em duas crianças não relacionadas, portadoras de PPDG idiopática. Ambas as variantes estão localizadas na região amino-terminal da kisspeptina-54 e estavam ausentes em 400 alelos controles. A variante p.P74S foi identificada em heterozigose em um menino que desenvolveu puberdade com um ano de idade. Sua mãe e avó materna, que apresentavam história de desenvolvimento puberal normal, eram portadoras da mesma variante em heterozigose, sugerindo penetrância incompleta e/ou herança sexo-dependente. A variante p.H90D foi identificada em homozigose em uma menina com PPDG, que desenvolveu puberdade aos seis anos de idade. Sua mãe, com história de menarca aos dez anos de idade, era portadora da mesma variante em heterozigose. Células transfectadas estavelmente com GPR54 foram estimuladas com concentrações crescentes de kisspeptina-54 (kp-54) humana selvagem ou contendo as mutações (kp-54 H90D e kp-54 P74S) e o acúmulo de fosfato de inositol (IP) foi medido. Nos estudos in vitro, a kp-54 P74S apresentou uma capacidade de ativação do receptor GPR54 semelhante à kp-54 selvagem. A kp-54 p.H90D mostrou uma ativação da sinalização do receptor significativamente mais potente que a kp-54 selvagem, sugerindo que essa é uma mutação ativadora. No grupo de HHI, uma nova variante (c.588-589insT) foi identificada em heterozigose na região 3 não traduzida do gene KISS1 em um paciente do sexo masculino. O papel dessa variante no fenótipo de HHI permanece indeterminado. Em conclusão, duas mutações no gene KiSS1 foram descritas pela primeira vez em associação com PPDG.
Título em inglês
KISS1 gene analysis in patients with central pubertal disorders
Palavras-chave em inglês
Gonadotropin-releasing hormone
Gonadotropins
Hypogonadism
Hypotjalamo-hupophyseal system
Mutations
Puberty precocious
Tumor suppressor proteins
Resumo em inglês
Kisspeptin, encoded by the KISS1 gene, is an important regulator of puberty onset. After binding to its receptor GPR54, kisspeptin stimulates gonadotropin-releasing hormone secretion by the hypothalamic neurons. Inactivating GPR54 mutations are a rare cause of normosmic isolated hypogonadotropic hypogonadism (IHH). Recently, a unique GPR54 activating mutation was implicated in the pathogenesis of gonadotropin dependent precocious puberty (GDPP). Based on these observations, we hypothesized that mutations in the KISS1 gene might be associated with central pubertal disorders. The aim of this study was to investigate KISS1 mutations in idiopathic GDPP and normosmic IHH. Sixty-seven Brazilian children (63 girls and 4 boys) with idiopathic GDPP and 61 patients with normosmic IHH (40 men and 21 women) were selected. Familial and sporadic cases were included in both groups. The control population consisted of 200 individuals who had normal timing of puberty. The promoter region and the 3 exons of the KISS1 gene were amplified and automatically sequenced. Two novel KISS1 missense mutations, p.P74S and p.H90D, were identified in two unrelated children with idiopathic GDPP. Both mutations were absent in 400 control alleles and are located in the amino-terminal region of kisspeptin-54. The p.P74S mutation was identified in the heterozygous state in a boy who developed puberty at 1 yr of age. His mother and maternal grandmother, who had normal pubertal development, were also heterozygous for the p.P74S mutation, suggesting incomplete penetrance and/or sex-dependent inheritance. The p.H90D mutation was identified in the homozygous state in a girl with GDPP, who developed puberty at 6 yr of age. Her mother, who had menarche at 10 yr of age, carried the p.H90D mutation in the heterozygous state. CHO cells stably transfected with GPR54 were stimulated with different concentrations of synthetic human wild type or mutant kisspeptin-54 (KP54) and inositol phosphate (IP) accumulation was measured. In vitro studies revealed that the capacity of the p.P74S mutant KP54 to stimulate IP production was similar to the wild type. The p.H90D kisspeptin-54 showed a significantly more potent activation of GPR54 signaling in comparison to the wild type in vitro, suggesting a gain-of-function mutation. In the IHH group, a heterozygous variant in the 3 UTR of the KISS1 gene (c.588-589insT) was identified. The role of this variant in the IHH phenotype remains to be determined. In conclusion, two KiSS1 mutations were described for the first time in association with GDPP.
 
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Data de Publicação
2009-05-22
 
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  • Silveira, L.F.G., et al. Kisspeptin and clinical disorders. Advances in Experimental Medicine and Biology, 2013, vol. 784, p. 187-199.
  • Silveira, L.F.G., et al. Role of Kisspeptin/GPR54 System in Human Reproductive Axis [doi:10.1159/000312689]. Frontiers of Hormone Research [online], 2010, vol. 39, p. 13-24.
  • Silveira, L.F.G., et al. A novel Kiss1 gene mutation in a boy with idiophatic gonadotropin-dependent precocious puberty. In XVIII Annual Meeting of the Sociedad Latinoamericana de Endocrinologia Pediatrica - SLEP, Viña del Mar, 2006. Jornal of Pediatric Endocrinology and Metabolism., 2006. Resumo.
  • Silveira, L.F.G., et al. Análise das variantes alélicas do gene Kiss-1 em crianças com puberdade precoce dependente de gonadotrofina idiopática. In Congresso Paulista de Endocrinologia e Metabologia - COPEM2007, São Paulo, 2007. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e Metabologia., 2007. Resumo.
  • Silveira, L.F.G., et al. Two KISS1 mutation associated with gonadotropin-dependent precocious puberty. In 47th Annual Meeting of the European Society for Paediatic Endocrinology (ESPE), Istambul, 2008. Hormone Research ., 2008. Abstract.
  • Silveira-Neto, A.P., et al. Analysis of the KISS1 promoter region in children with idiopathic gonadotropin-dependent precocious puberty. In 8º COPEM Congresso Paulista de Endocrinologia e Metabologia,, São Paulo, 2009. Program & Abstracts., 2009. Abstract.
  • Silveira-Neto, A.P., et al. Analysis of the KISS1 Promoter Region in Children with Idiopathic Gonadotropin-Dependent Precocious Puberty. In The Endocrine Society 91st Annual Meeting - ENDO 2009, Washington/DC, 2009. Program & Abstracts., 2009. Abstract.
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