Ao ser excitado do estado fundamental para o estado singlete excitado, o Pk_a do equilíbrio ácido-base das antocianinas apresenta um deslocamento de ca. 4 para ca. -1. Esta característica de superfotoácido, aliado à técnica de fotólise por pulso de laser, permite a perturbação da posição do equilíbrio ácido-base no estado fundamental. O acompanhamento da cinética de reestabelecimento do equilíbrio inicial, existente antes do pulso do laser, permite a determinação das constantes de desprotonação k_d e protonação k_p no estado fundamental. Este método foi aplicado para a determinação das constantes de protonação e desprotonação das seguintes antocianinas sintéticas e naturais: 4-metil-7-hidroxiflavílio (HMF), 4', 7-dihidroxiflavílio (DHF), malvidina-3-glucosídeo (Oenina), malvidina-3,5-diglucosídeo (Malvina), pelargonidina-3,5-diglucosídeo (Pelargonina) e cianidina-3 ,5-diglucosídeo (Cianina). Assim, as constantes de desprotonação do estado fundamental são: k_d = 1,4 x 10⁶ s^-1 (HMF), 3,1 x 10⁶ s^-1 (DHF), 5, 1 x 10⁶ s^-1 (Oenina), 3,8 x 10⁶ s^-1 (Malvina), 1,3 x 10⁶ s^-1 (Pelargonina) e 1,8 x 10⁶ s^-1 (Cianina). As constantes de protonação do estado fundamental são:k_p = 3,56 x 10¹⁰ L mol^-1 s^-1 (HMF), 3,06 x 10¹⁰ L mol^-1s^-1 (DHF), 2,51 x 10¹⁰ L mol^-1s^-1 (Oenina), 2,9 x 10¹⁰ L mol^-1s^-1 (Malvina), 3,6 x 10¹⁰ L mol^-1s^-1 (Pelargonina) e 2,2 x 10¹⁰ L mol^-1s^-1 (Cianina). Nosso método é a única técnica que permite a determinação direta destas constantes. Este método também permite a determinação de k_d e k_p em meios micro-heterogêneos. Através de medidas de k_d , foi possível provar que ocorre a estabilização do cátion flavílio de HMF em micelas aniônicas de SOS (dodecilsulfato de sódio). Em micelas não iônicas e catiônicas, por outro lado, ocorre a desestabilização do cátion flavílio, que se manifesta através do aparecimento de reatividade ausente em solução aquosa. Os resultados da aplicação deste método revelam ainda que o principal processo de dissipação da energia da luz, absorvida pelas antocianinas, é a transferência de próton no estado excitado e não a fluorescência.

Upon excitation from the ground state to the first excited singlet state, the pK_a of the acid-base equilibrium of anthocyanins exhibits a large shift, from ca. 4 to ca. -1. This characteristic of super-photoacidity, coupled with the technique of laser flash photolysis, can be employed to perturb the position of the acid-base equilibrium in the ground state. Monitoring the kinetics of relaxation back to the initial equilibrium position that existed prior to the laser pulse permits determination of the rate constants for protonation (k_p) and deprotonation (k_d) in the ground state. This method was applied to the following natural and synthetic anthocyanins: 4-methyl-7-hydroxyflavylium (HMF); 4', 7-dihydroxyflavylium (DHF); malvidine-3-glucoside (Oenin); malvidine-3,5-diglucoside (Malvin); Pelargonidine-3,5-diglucoside (Pelargonin); and. cyanidine-3,5-diglucoside (Cyanin). Thus, the ground state deprotonation rate constants (k_d) for the acid form were found to be: 1.4 x 10⁶ s^-1 (HMF); 3.1 x 10⁶ s^-1 (DHF); 5.1 x 10⁶ s^-1 (Oenin); 3.8 x 10⁶ s^-1 (Malvin); 1.3 x 10⁶ s^-1 (Pelargonin); 1.8 x 10⁶ s^-1 (Cyanin). The corresponding rate constants for protonation of the ground state of the base (k_p) were: 3.6 x 10¹⁰ M^-1s^-1 (HMF); 3.1 x 10¹⁰ M^-1s^-1 (DHF); 2.5 x 10¹⁰ M^-1s^-1 (Oenin); 2.9 x 10¹⁰M^-1s^-1 (Malvin); 3.6 x 10¹⁰ M^-1s^-1 (Pelargonin); 2.2 x 10¹⁰ s^-1 (Cyanin). Our method is currently the only one that permits direct determination of these rate constants. This method also allows the determination of k_pand k_d in microheterogeneous media. Thus, employing measurements of k_d, it was possible to demonstrate that anionic SDS (sodium dodecyl sulfate) micelles stabilize the flavylium cation form of HMF. In cationic and nonionic micelles, however, the flavylium cation is destabilized, which manifests itself via the appearance of reactivity that is absent in aqueous solution in the absence of these surfactants. Finally, the results of the application of this method show that the primary energy wasting process for radiant energy absorbed by anthocyanins is excited state proton transfer rather than fluorescence.