• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.46.2006.tde-18092006-132143
Documento
Autor
Nome completo
Luiz Eduardo Cabral Von Dannecker
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2006
Orientador
Banca examinadora
Malnic, Bettina (Presidente)
Garcia, Célia Regina da Silva
Gueiros Filho, Frederico José
Markus, Regina Pekelmann
Ulrich, Alexander Henning
Título em português
Ric-8B, um provável GEF para Galpha-olf, promove expressão funcional de receptores olfatórios
Palavras-chave em português
Olfato
Percepção de odores
Receptores olfatórios
Resumo em português
Os odores são detectados por uma grande família de receptores olfatórios (ORs) que são expressos nos neurônios olfatórios localizados no nariz. Os ORs ativados por um determinado odor acoplam-se à proteína Galfaolf que irá promover a ativação da adenilil ciclase III, resultando na produção de AMPc. O aumento da concentração de AMPc irá ativar canais iônicos dependentes de AMPc, tendo como consequência a despolarização do neurônio olfatório. A informação desencadeada pela ativação de determinados ORs é então transmitida para regiões específicas do cérebro promovendo a percepção do odor. A determinação da especificidade dos ORs para diferentes odores irá contribuir para o entendimento de como os odores são discriminados pelo sistema olfatório, entretanto, poucos ORs tiveram seus ligantes definidos devido a dificuldade de expressão funcional de ORs em sistema heterólogo. Em nosso trabalho, utilizamos o sistema de duplo-híbrido em levedura a fim de determinar potenciais novos reguladores para Galfaolf. Deste experimento, identificamos que Ric-8B (Ric, abreviatura de Resistant to Inhibitors of Cholinesterase), um provável GEF (GTP Exchange Factor), é capaz de interagir com Gaolf. Assim como Gaolf, Ric-8B é predominantemente expresso nos neurônios olfatórios maduros e em regiões específicas do cérebro. A restrita co-localização de Gaolf e Ric-8B fortemente indica que Ric-8B é uma proteína que participa da via de transdução de sinal de Galfaolf. Através de nossos ensaios, utilizando células HEK-293, foi possível mostrar que Ric-8B é capaz de potencializar a atividade de Galfaolf, tendo como consequência o aumento da produção de AMPc em sistema heterólogo. Por fim, nós mostramos que Ric-8B é capaz de promover a expressão funcional de ORs em sistema heterólogo. Nossos resultados demonstram que a expressão de Ric-8B é capaz de aumentar o acúmulo de Galfaolf na periferia de células HEK-293T, indicando que Ric-8B promove a expressão funcional de ORs provavelmente através da melhora da eficiência do acoplamento dos ORs com Galfaolf. Nossos resultados demonstram que o uso de Ric-8B em um sistema em larga escala irá permitir a expressão funcional de diversos ORs, permitindo a identificação de seus respectivos ligantes. Tal análise irá contribuir para o melhor entendimento do mecanismo de percepção dos odores.
Título em inglês
Ric-8B, a putative GEF for Galpha-olf, promotes functional expression of odorant receptors
Palavras-chave em inglês
Odor perception
Olfaction
Olfactory receptors
Olfactory system
Resumo em inglês
Odorants are detected by a large family of odorant receptors (ORs) expressed in the olfactory neurons in the nose. The activated receptors couple to an olfactory-specific G-protein (Galphaolf), which activates adenylyl cyclase III to produce cAMP. Increased cAMP levels activate cyclic nucleotide-gated channels, causing cell membrane depolarization. The information provided by the odorant receptors is transmitted to specific regions of the brain leading to odorant perception. The determination of the odorant specificities of the different ORs will contribute to the understanding of how odorants are discriminated by the olfactory system. However, only a few ORs have been linked to odorants they recognized to date because ORs are not efficiently expressed in heterologous cells since they are poorly expressed on the cell surface. Here we used yeast two-hybrid to search for potential regulators for Galphaolf. We found that Ric-8B (for Resistant to Inhibitors of Cholinesterase), a putative GTP exchange factor, is able to interact with Gaolf. Like Gaolf, Ric-8B is predominantly expressed in the mature olfactory sensory neurons and also in a few regions in the brain. The highly restricted and colocalized expression patterns of Ric-8B and Galphaolf strongly indicate that Ric-8B is a functional partner for Galphaolf. We show that Ric-8B is able to potentiate Galphaolf-dependent cAMP accumulation in human embryonic kidney 293 cells and therefore may be an important component for odorant signal transduction. Finally, we show that Ric-8B promotes efficient heterologous expression of ORs. Our results show that Ric-8B enhances accumulation of Galphaolf at the cell cortex, indicating that it promotes functional OR expression probably by improving the efficiency of OR coupling to Galphaolf. Our results demonstrate that the employment of Ric-8B in a high-throughput system will allow the functional screening of the OR family members and thereby provide further insight into the mechanisms of odor perception.
 
AVISO - A consulta a este documento fica condicionada na aceitação das seguintes condições de uso:
Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
TESELUIZDANNECKER.pdf (1.42 Mbytes)
Data de Publicação
2007-03-21
 
AVISO: Saiba o que são os trabalhos decorrentes clicando aqui.
Todos os direitos da tese/dissertação são de seus autores
Centro de Informática de São Carlos
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP. Copyright © 2001-2018. Todos os direitos reservados.