O objetivo do presente trabalho foi propor e estabelecer um novo método de preparação de peptídeos protegidos α-esterificados. Para tal, investigamos inicialmente o efeito da presença de HAc, Ca(OAc)₂ e mistura de ambos na eficiência de metanólise de Ac-Ala-Gly-X-KOR (onde, X= Gly, Ala ou Phe) em DCM. Surpreendemente, as reações assistidas por Ca²⁺ forneceram os produtos esterificados desejados com os mais altos rendimentos. Com base nestes dados comparamos as eficiências das reações de metanólise de Ac-Ala-Gly-X-KOR [onde, X= Lys(2-Cl-Z), Phe, Ala ou Gly] asssistidas pelo íon cálcio. Estas se mostraram dependentes da natureza do resíduo C-terminal ligado à resina, pois os rendimentos de desligamento peptídeo da KOR obtidos para as reações de 6 horas apresentaram a seguinte ordem: Lys(2-Cl-Z)< Phe 2 empregando peptidil-KOR relacionados ao hormônio colecistocinina: Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-KOR(1), Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR (2) e Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Arg(Mtr)-KOR (3). Os rendimentos de desligamento dos peptídeos 1, 2 e 3 foram 54, 68 e 84%, respectivamente. Não foram detectadas nos meios reacionais quantidades significativas de produtos secundários resultantes de rearranjos ou de transesterificação simultânea do éster presente na cadeia lateral do resíduo de ácido aspártico. Estes resultados evidenciaram que a assistência do Ca²⁺ é seletiva e o método aplicável a peptídeos contendo arginina e ácido aspártico protegidos ligados à resina de Kaiser. O efeito do solvente foi investigado realizando-se metanólises de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR em DCM, DMSO e CHCl₃ em presença de Ca(OAc)₂. Em 72 horas as metanólises realizadas em DMSO foram quantitativas, enquanto que em DCM ou CHCl₃ estas apresentaram rendimentos de ~63%. Em seguida, examinamos a capacidade do Eu³⁺ em assistir a reação de metanólise de peptidil-KOR em DCM. Os rendimentos de desligamento do peptídeo foram semelhantes ou ligeiramente superiores aos obtidos em presença de Ca²⁺. Estudos adicionais demonstraram que não é necessário excesso molar de Ca²⁺ ou Eu³⁺ para o aumento da eficiência das metanólises. Metanólise e etanólise de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR em DCM e DMSO em presença de Ca(OAc)₂, EuCl₃ e TbCl₃ também foram realizadas. As metanólises em DCM em presença de Ca²⁺, Eu³⁺ ou Tb³⁺ forneceram o produto desejado com 62, 95 ou 95% de rendimento, respectivamente. Em DMSO, a reação assistida por Ca²⁺ foi quantitativa, mas nenhum produto foi obtido em presença de Eu³⁺ ou Tb³⁺. As etanólises em DCM assistidas por estes ións lantanídicos foram também mais eficientes do que as mediadas por Ca²⁺ (28, 17 e 5%, respectivamente). Em DMSO, observou-se a formação do éster etílico apenas para a reação assistida por Ca²⁺. O rendimento de desligamento do peptídeo da KOR foi de 80%, mas observou-se a presença de um produto secundário no peptídeo α-esterificado bruto. Novamente, nenhum produto foi obtido nas reações assistidas por Eu³⁺ ou Tb³⁺ em DMSO. Estudos adicionais demonstraram que Ca(OAc)₂ pode também assistir a aminólise de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR por Arg(HCl)OMe ou Arg(HCl)OEt em DMF. Os rendimentos de desligamento do peptídeo da KOR foram superiores a 70%, sendo os ésteres desejados os produtos majoritários formados nos meios reacionais (47 e 68% do total, respectivamente). Na ausência do íon metálico, os rendimentos foram de apenas 10-13%. Reações comparativas evidenciaram que a aminólise assistida por Ca²⁺ é equivalente (ou ligeiramente inferior em termos de seletividade) àquelas descritas na literatura catalisadas pelo ácido acético. Tentativas de aminólise em DMSO, NMP e DMSO/tolueno (1:1, v:v) na presença de Ca²⁺, Eu³⁺ e Tb³⁺ também foram feitas. Os resultados demonstraram que apenas o Ca²⁺ foi capaz de assistir a maioria delas. Isto ocorreu provavelmente devido a interações entre o DMSO e os lantanídeos. Uma análise preliminar de Ac-Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-KOR e de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR através de HR-MAS na presença e ausência de Ca²⁺ foi feita com o intuito de investigar as interações estabelecidas entre o íon metálico e os peptídeos sob o ponto de vista estrutural. Os resultados obtidos sugeriram que a presença do Ca²⁺ diminue a mobilidade da cadeia peptídica, o que sugere complexação. Uma complexação tomaria a ligação peptídeo-KOR mais susceptível ao ataque nucleofílico do álcool ou aminoácido esterificado. Medidas de inchamento de peptidil-KOR em diferentes solventes puros e nas misturas utilizadas nos estudos descritos acima demonstraram que a solvatação da peptidil-KOR não é o fator determinante na eficiência destas reações. Por outro lado, estudos qualitativos sugeriram, que a solubilidade dos sais de cálcio, európio e térbio seja crucial. Concluindo, os dados obtidos até o momento indicam que a metanólise, etanólise e aminólise de peptidil-KOR assistidas pelos íons Ca²⁺ consistem em uma alternativa nova e atraente para preparar ésteres α-metílicos e α-etílicos de N_α-acil-peptídeos totalmente protegidos ou desprotegidos. As reações foram realizadas em pH aparente neutro e se mostraram muito seletivas à ligação oxima.

The ultimate goal of the present work was to propose and stablish a new method to prepare a-esterified protected peptides. At first, we examined the effect of HAc, Ca(OAc)₂ and mixtures of both on the efficiency of methanolysis of Ac-Ala-Gly-X-KOR (where, X= Gly, Ala or Phe) in DCM. Surprisingly, the reactions carried-out in the presence of Ca(OAc)₂ gave the corresponding esterified peptides with the highest yields. Based on these data, we compared the efficiencies of methanolysis of Ac-Ala-Gly-X-KOR [where, X= Lys(2-Cl-Z), Phe, Ala or Gly] assisted by the calcium ion. They showed to be dependent on the nature of the C-terminal residue linked to the solid support since the yields found for 6-hour reactions were: Lys(2-Cl-Z)< Phe 2 suspended in DCM, DMSO and CHCl₃ were carried-out. That in DMSO was quantitative while those in DCM or CHCl₃ yielded the esterified peptide with 63% in 72 h. The ability of Eu³⁺ to assist methanolysis of peptidyl-KOR in DCM was demonstrated since peptide detachment yields for some reactions were similar or slightly superior to those assisted by Ca²⁺. Additional studies showed that molar excess of Ca²⁺ or Eu³⁺ is not required for the enhancement of methanolysis efficiency. Comparative methanolyses and ethanolyses of Ac-lle-Ser(Bzl)Asp(OcHex)-KOR assisted by Ca²⁺, Eu³⁺ and Tb³⁺ in different solvents were also studied. Methanolysis in DCM in the presence of Ca²⁺, Eu³⁺ or Tb³⁺ supplied the desired product with yields of 62, 95 or 95%, respectively. In DMSO, the reaction assisted by Ca²⁺ was quantitative, but no product was formed in presence of Eu³⁺ or Tb³⁺. Ethanolysis in DCM assisted by Eu³⁺ or Tb³⁺ was also more efficient than that performed in presence of Ca²⁺ (28, 17 and 5%, respectively). However, in DMSO the desired α-ethyl ester was formed only in the presence of Ca²⁺. We were able to show that Ca(OAc)₂ can also assist the aminolysis of Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR in DMF by Arg(HCl)OMe or Arg(HCl)-OEt. The peptide detachment yields were higher than 70%, being the desired esters the major products formed in the reaction medium. In the absence of the metal ion, yields were only 10-13%. Further studies evidenced that aminolysis assisted by Ca²⁺ is equivalent (or slightly inferior in terms of selectivity) to those described in the literature that uses HAc as catalyst. Attempts of aminolysis in DMSO, NMP, DMSO/toluene (1:1, v/v) containing Ca²⁺, Eu³⁺ and Tb³⁺ showed that only Ca²⁺ was able to assist the formation of the esterified peptide in all these solvents. This is probably due to DMSO interaction with the lanthanide ions. Preliminary analyses of two peptidyl-KOR by HR-MAS in the presence and absence of Ca²⁺ were performed in order to obtain structural information that could help us to determine the interactions established between the metal ion and peptides. The results found indicated that the presence of Ca²⁺ makes peptide chain less mobile, which suggests complexation. A complexation could make the peptide-resin oxime bond more susceptible to nucleophilic attacks, favoring solvolysis and aminolysis. Swelling measurements of Ac-Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-KOR and Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR in pure solvents and in the mixtures employed showed that the solvation of peptidyl-KOR is not the factor that determines the efficiency of these reactions. On the other hand, qualitative studies suggested that the solubility of the calcium, europium and terbium salts could be crucial. Hence, the data presented here indicate that methanolysis, ethanolysis and aminolysis of peptidyl-KOR assisted by Ca²⁺ provide a new alternative and attractive way to prepare fully protected or unprotected N_α-acyl-peptides α-methyl and α-ethyl esters. The reactions were performed at neutral pH and showed to be very selective to oxime bond.