Tesis Doctoral
DOI
https://doi.org/10.11606/T.42.2010.tde-18102010-112445
Documento
Autor
Nombre completo
Patricia Diogo de Melo Godoy
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2010
Director
Tribunal
Sabbaga, Maria Carolina Quartim Barbosa Elias (Presidente)
Armelin, Hugo Aguirre
Hemerly, Adriana Silva
Ho, Paulo Lee
Winter, Lucile Maria Floeter
Título en portugués
Estudos sobre o componente ORC1/CDC6 da maquinaria de pré-replicação dos tripanossomas.
Palabras clave en portugués
Trypanosoma
ATPase
DNA
Orc1/Cdc6
Pré-replicação
Proteínas
Resumen en portugués
Em eucariotos, a origem de replicação é reconhecida por um complexo ORC, a proteína Cdc6 e outras proteínas. Nos tripanossomas, encontramos somente uma proteína similar a Orc1 e Cdc6, que chamaremos de Orc1/Cdc6. Nesta tese serão descritos os estudos realizados sobre Orc1/Cdc6 do Trypanosoma cruzi e do Trypanosoma brucei. As proteínas recombinantes dos tripanossomas apresentam atividade de ATPase e são capazes de substituir Cdc6 em ensaio de complementação em leveduras. A indução do silenciamento do gene de Orc1/Cdc6 por RNAi resulta em células anucleadas. Orc1/Cdc6 é expressa durante todo o ciclo celular das formas replicativas, permanecendo associada à cromatina. No caso do T.cruzi, Orc1/Cdc6 é expressa não só nas formas replicativas, mas também nas formas não replicativas. Nestas últimas, a proteína expressa não interage com o DNA, este resultado sugere que a ausência desta interação deve contribuir para ausência da duplicação do DNA nas formas infectivas do T. cruzi.
Título en inglés
Studies of the Orc1/Cdc6 component of pre-replication machinery of trypanosomes.
Palabras clave en inglés
Trypanosoma
ATPase
DNA
Orc1/Cdc6
Pre-replication
Proteins
Resumen en inglés
In eukaryotes, the replication origin is recognized by a complex ORC, Cdc6 and other proteins. The trypanosomes contain only one protein, we named it Orc1/Cdc6. Here we show that the recombinant Orc1/Cdc6 from T.cruzi (TcOrc1/Cdc6) and from T.brucei (TbOrc1/Cdc6) present ATPase activity, replaced yeast Cdc6 in a phenotypic complementation assay. The induction of Orc1/Cdc6 silencing by RNA interference in T.brucei resulted in enucleated cells. Orc1/Cdc6 is expressed during the entire cell cycle and in all stages of the life cycle of trypanosomes, remaining associated with chromatin in all stages of the cell cycle. This association is different among the stages from T. cruzi life cycle. In the non replicative ones, Orc1/Cdc6 does not interact with DNA. The lack of pre-replication machinery-DNA interaction in T. cruzi non-replicative stages might contribute to the absence of DNA replication in these stages.
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Fecha de Publicación
2010-11-05