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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.42.2018.tde-15032018-114735
Documento
Autor
Nome completo
Marco Antonio Arantes da Silva
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2017
Orientador
Banca examinadora
Winter, Carlos Eduardo (Presidente)
Dolinski, Claudia de Melo
Fogaça, Andréa Cristina
Ribeiro, Alberto Augusto Gonçalves de Freitas Castro
Título em português
Clonagem e expressão de CipA (PMN_0325), um cristal intracitoplasmático de Photorhabdus luminescens linhagem MN7 em Escherichia coli.
Palavras-chave em português
Heterorhabditis
Nematoide
Proteína recombinante
Resumo em português
Photorhabdus luminescens MN7 é uma enterobactéria associada a seus simbionte, nematoides da espécie Heterorhabditis baujardi LPP7, coletada em Monte Negro (RO), Brasil. As bactérias do gênero Algumas linhagens de P. luminescens possuem no seu citoplasma dois cristais proteicos compostos das CIPs (Crystal Inclusion Proteins A e B). Na fase estacionária de crescimento esses cristais são até 40% do total de proteínas na célula. Fizemos uma estratégia para clonar e expressar a ORF completa dos genes que codificam CipA, CipB e CipB2 de MN7. Os três genes foram amplificados e subclonados, mas apenas CipA foi expressa em Escherichia coli. A proteína recombinante foi purificada em coluna de Níquel N2+ e utilizada para inóculo em camundongos Balb/c. CipB foi clonada no plasmídeo de expressão, mas não foi expressa quando induzida. CipB2 foi amplificada, mas não foi clonada no plasmídeo de expressão. Também foi amplificado e subclonado o fragmento de miniSOG (mini Singlet Oxygen Generator), para ser ligado aos genes das CIPs que foram clonados para ensaios de fluorescência.
Título em inglês
Cloning and expression of CipA (PMN_0325), an intracytoplasmic crystal of Photorhabdus luminescens MN7 strain in Escherichia coli.
Palavras-chave em inglês
Heterorhabditis
Photorhabdus luminescens
Recombinant protein
Resumo em inglês
Photorhabdus luminescens MN7 is an enterobacterium associated with its symbiont, nematodes of the Heterorhabditis baujardi LPP7 species, collected in Monte Negro (RO), Brazil. Bacteria of the genus of P. luminescens lineages do not have their cytoplasm two protein crystals composed of CIPs (Crystal Inclusion Proteins A and B). In the stationary phase of growth of the crystals are up to 40% of the total proteins in the cell. We have devised a strategy to clone and express a complete ORF of the genes encoding MN7 CipA, CipB and CipB2. All three genes were amplified and subcloned, but only CipA was expressed in Escherichia coli. The recombinant protein was purified on a Nickel N2+ column and used for inoculum in Balb / c mice. CipB was cloned without expression plasmid, but was not expressed when induced. CipB2 was amplified, but was not cloned without expression plasmid. The miniSOG (mini Singel Oxygen Generator) fragment was also amplified and subcloned to be linked to the genes of the CIPs that were so cloned for fluorescence assays.
 
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Data de Liberação
2020-03-14
Data de Publicação
2018-03-15
 
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