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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.42.2008.tde-09092008-113238
Documento
Autor
Nome completo
Hélcio Yogi Ono
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2008
Orientador
Banca examinadora
Moriscot, Anselmo Sigari (Presidente)
Giannocco, Gisele
Peroni, Cibele Nunes
Título em português
Transferência gênica in vivo por meio de eletroporação em músculo sóleo de ratos wistar.
Palavras-chave em português
Eletroporação
Músculo esquelético
Plasmídeos
Proteínas de fluorescência verde
Sóleo
Transferência de genes
Resumo em português
A proposta deste trabalho é a padronização do método de eletroporação direta (utilizando eletrodos) em músculo sóleo de ratos wistar. Deste processo físico, pudemos variar a voltagem, o número de pulsos e duração do pulso. O objetivo principal foi à busca de um parâmetro ideal onde deveria haver a menor lesão tecidual com a maior quantidade de expressão do GFP. Métodos de análise (fluorescência e histologia) foram utilizados para a determinação da eficiência de transferência de genes, onde se considerou a razão entre as fibras musculares sadias emissoras fluorescência e o número total de fibras sadias. Como resultado, atingimos a taxa de eficiência de (50,3 ± 20%) em transferência de genes, utilizando a voltagem de 25 V, trem de 8 pulsos com duração de 20ms e freqüência de 1Hz. A possibilidade de interferir na função deste músculo abre a perspectiva de se estudar o papel de certos genes na plasticidade muscular esquelética, especialmente no crescimento muscular longitudinal.
Título em inglês
In vivo gene transfer by electroporation in soleus muscle from wistar rats.
Palavras-chave em inglês
Eletroporation
Gene transfer
Green fluorescence protein
Plasmid
Skeletal muscle
Soleus
Resumo em inglês
The use of electrical pulses for gene transfer has been successfully used to reach significant levels of gene expression in vitro and in vivo. Therefore electroporation can be considered an important device to get further insight on biological mechanisms and also to treatment. The aim of the present work is to achieve a high level of gene transfer throughout electroporation in the soleus muscle of Wistar rats. The muscle was surgically accessed, injected with Hyaluronidase and subsequently injected with a plasmid expressing GFP (Green Fluorescence Protein). Observation of fluorescence produced in situ and also HE (Hematoxilin-eosin) preparations revealed that the best gene transfer efficiency (50, 3 ± 20%) was achieved with 25 V and 8 pulses (1Hz) lasting 20ms. These results point to a potential use of electroporation as a tool for investigating cellular and molecular aspects of skeletal muscle plasticity, especially those that can be approached only in soleus muscle, such as longitudinal growth.
 
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Data de Publicação
2008-09-11
 
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