Glioblastoma multiforme (GBM) é o tumor cerebral mais agressivo e maligno e se caracteriza pelo complexo microambiente tumoral (TME) constituído por componentes celulares e não celulares que interagem para sabotar a resposta do sistema imune. Nos últimos anos, a imunoterapia ativa tem surgido como a alternativa para a restauração de tal resposta. Ultimamente, o desenvolvimento de modelos in vitro como os esferóides, tornaram-se numa plataforma interessante para estudar as complexas interações entre o TME e o sistema imune, ajudando assim na otimização de abordagens terapêuticas. Portanto, no presente trabalho, foi avaliado a resposta imune de pacientes submetidos a imunoterapia de células dendríticas e o desenvolvimento do modelo tridimensional in vitro de GBM para o estudo da resposta imune contra o tumor, com enfase no papel das células dendríticas. Assim, tres tipos de esferóides tumorais: homotípicos, heterotípicos e derivados de paciente foram elaborados no intuito de recriar o TME e avaliar o efeito deste sobre as mo-DCs de doadores saudaveis, observando-se que mo-DCs expostas ao TME adotam um fenótipo de pseudomaduração que se reflete na ineficácia para estimular a linfoproliferação de linfócitos alogeneicos. Em paralelo, foi feita a caracterização do infiltrado leucocitario, observando-se que no GBM há predominancia de populações mieloides. Por outro lado, as mo-DCs de pacientes após serem operados e vacinados, mostraram um fenotipo maduro o qual se correlaciona com sua capacidade para estimular a proliferação de linfócitos alogeneicos e com uma boa resposta á imunoterapia, sendo que um dos pacientes houve a regressão total do tumor. Finalmente, linfócitos co-cultivados com mo-DCs expostas ao TME, foram testados para avaliar seu potencial citotóxico contra os esferóides, observando-se a destruição do esferóide após 24h. Em conclusão o presente trabalho mostra a eficácia da imunoterapia com células dendríticas alogêneicas e a riqueza potencial dos esferóides como uma plataforma para o entendimento do TME e sua relação com o sistema imune.

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive and malignant brain tumor and is characterized by the complexity of their tumor microenvironment (TME) consisting of cellular and non-cellular components that interact in order to hijack the immune response. In recent years, active immunotherapy has emerged as the alternative to the restoration of such response. Moreover, the development in the last years of in vitro models such as tumor spheroids has become in an interesting platform to study the complex interactions between TME and the immune system, thus helping to optimize therapeutic approaches. Therefore, in the present study, we evaluated the immune response of patients undergoing dendritic cell immunotherapy and the development of an in vitro GBM three-dimensional model for the study of the tumor immune response, focusing on the role of dendritic cells. Thus, three types of tumor spheroids: homotypic, heterotypic and patient-derived were designed to recreate TME and to evaluate the effect of this on the mo-DCs of healthy donors, observing that mo-DCs exposed to TME adopt a phenotype of pseudo maturity that is reflected in the inefficacy to stimulate lymphoproliferation of allogeneic lymphocytes. In parallel, the characterization of the leukocyte infiltrate was made, observing that in GBM there is a predominance of myeloid populations. On the other hand, mo-DCs from patients, after tumor resection and two rounds of vaccination, showed a mature phenotype which correlates with their ability to stimulate allogeneic lymphocyte proliferation and a good response to immunotherapy, with one of the patients showing total tumor regression. Finally, lymphocytes co-cultured with mo-DCs exposed to TME were tested to evaluate their "cytotoxic" potential against spheroids, observing after 24h a destruction of the spheroid. In conclusion, the present work shows the efficacy of immunotherapy with allogeneic dendritic cells and the potential richness of spheroids as a platform for the understanding of TME and its relationship with the immune system.