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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.42.2010.tde-11082010-142826
Documento
Autor
Nome completo
Alessandra Veloso de Melo
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2010
Orientador
Banca examinadora
Tambourgi, Denise Vilarinho (Presidente)
Farsky, Sandra Helena Poliselli
Isaac, Lourdes
Título em português
Identificação de protease(s) endógena(s) de eritrócitos humanos, ativada(s) por esfingomielinases D de venenos de aranhas Loxosceles, envolvidas no fenômeno de hemólise dependente de complemento.
Palavras-chave em português
Animais peçonhentos
Aranhas Loxosceles
Esfingomielinases D
Glicoforinas
Hemólise intravascular
Proteases endógenas
Sistema Complemento
Venenos
Resumo em português
Hemólise intravascular, causada pelo envenenamento por aranhas Loxosceles, é dependente da ação da esfingomielinase D, toxina do veneno que se liga à membrana dos eritrócitos e ativa proteases responsáveis pela clivagem de glicoforinas, tornando as células sensíveis à ação lítica do Sistema Complemento autólogo. O objetivo do estudo foi identificar possíveis proteases envolvidas nesse processo. A toxina foi expressa, purificada e apresentou suas funções biológicas ativas. O tratamento de eritrócitos humanos com a toxina removeu glicoforinas da membrana, não teve ação sobre Kell, CD59, DAF e CR1 e induziu a deposição de C1q, C3, C4, C5b-9, fator B e properdina. O pré-tratamento das células com os inibidores galardina, bestatina e fenantrolina reduziu a hemólise dependente de complemento autólogo. A ativação de proteases das membranas sobre o substrato fluorescente Abz-FRSSR-EDDnp, induzida pela toxina, foi prevenida por PMSF, simvastatina e fenantrolina, sugerindo o envolvimento de metalo- e serinoproteases no modelo de hemólise dependente de complemento estudado.
Título em inglês
Identification of human erythrocyte endogenous protease(s), triggered by sphingomyelinases D form Loxosceles spiders venom, involved in the phenomenon of complement-dependent hemolysis.
Palavras-chave em inglês
Loxosceles spiders
Complement System
Endogenous proteases
Glycophorins
Intravascular hemolysis
Poisons
Sphingomyelinase D
Venomous animals
Resumo em inglês
Intravascular hemolysis caused by poisoning by spiders Loxosceles, is dependent on the sphingomyelinase D action, a toxin that binds to the erythrocytes membrane and activates proteases responsible for the glycophorins cleavage, rendering the cells sensitive to the lytic action of the autologous complement system. This study aimed to identify possible membrane proteases involved in this process. The toxin was expressed, purified and showed to be functionally active. Treatment of human erythrocytes with the toxin caused the removal of the membrane glycophorins, but did not act on Kell, CD59, DAF and CR1 and induced deposition of C1q, C3, C4, C5b-9, factor B and properdin. Pretreatment of cells with inhibitors galardin, phenanthroline and bestatin reduced the complement-dependent hemolysis. The action of membrane proteases upon the fluorescent substrate Abz-FRSSR-EDDnp, induced by the toxin, was prevented by PMSF, simvastatin, and phenanthroline, suggesting the involvement of metallo- and serine proteases in this complement-dependent hemolysis model.
 
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Data de Publicação
2010-09-15
 
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