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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.42.1999.tde-13082001-143828
Documento
Autor
Nome completo
Luiz Carlos Vieira
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 1999
Orientador
Banca examinadora
Durigon, Edison Luiz (Presidente)
Candeias, João Manuel Grisi
Richtzenhain, Leonardo Jose
Título em português
Detecção de Calicivírus Humano (Small Round Structured Virus-SRSV) pela Reação em Cadeia da Polimerase( PCR) em Ostras do Litoral do Estado de São Paulo.
Palavras-chave em português
caliciviridae
calicivírus humano
ostras
reação em cadeia por polimerase
são paulo sp
vírus norwalk
Resumo em português
Vírus causadores de gastroenterite, descritos como pequenos vírus de estrutura arredondada (Small Round Structured Viruses-SRSV), foram detectados em extratos de ostras Crassostrea spp., coletadas em regiões distintas do litoral do Estado de São Paulo, utilizando a Reação em Cadeia por Polimerase com transcrição reversa (RT-PCR).Treze lotes de amostras, contendo 10 g de estômagos e divertículos, foram processados para extração e concentração das partículas virais, mediante adsorção-eluição e precipitação por polietilenoglicol (PEG 6000), e purificação com fluorocarbono (Freon, Dupont Co.) para eliminação prévia dos inibidores da reação de RT-PCR. A extração do ácido nucleico viral, foi realizada com uma mistura de isotiocianato de guanidina e fenol (TRIzol ®, Gibco) e clorofórmio, sendo completada com uma purificação em coluna spin, com membrana de polissulfona (Millipore,Corp.). A reação de RT-PCR foi realizada em uma única etapa, utilizando o kit ''Super Script ONE-STEP RT-PCR System''® (Gibco). A reação de amplificação enzimática revelou, por eletroforese em gel de agarose (2%), corada com brometo de etídio, produtos de 123 bp, em 3 (23%) dos 13 lotes de amostras coletadas durante o verão de 1998, sendo verificadas em uma delas por imunomicroscopia eletrônica (IME),partículas de SRSV. Os produtos encontrados pertencem ao grupo genômico G2(Snow Mountain e outros vírus). A aplicação deste método possibilitou pela 1ª vez a detecção molecular de SRSVs no Brasil em ostras naturalmente contaminadas.
Título em inglês
Detection of human calicivirus (Small round structured virus - SRSV) using polymerase chain reaction (PCR) in oysters from São Paulo beaches, Brazil.
Palavras-chave em inglês
human calicivirus
norwalk virus
oysters
polymerase chain reaction
Resumo em inglês
The Small Round Structured Viruses (SRSVs) have been associated with gastroenteritis in humans, and were detected in extracts of oysters Crassostrea spp., by Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT - PCR). Thirteen lots of samples, originated from different regions of the State of São Paulo, were processed for viral particles extraction. The samples, containing 10 g of stomach and diverticula, were extracted by adsorption - elution and polyethylene glycol (PEG 6000) precipitation, and fluorocarbon (Freon, Dupont Co.) was used for purification and previous elimination of RT - PCR inhibitors. For the viral nucleic acid extraction, guanidine isothiocyanate - phenol mixture (TrizolÒ, Gibco ) and chloroform were used, followed by a polysulfone spin column (Millipore, Corp.) purification. The RT-PCR was done in one step, using the ''Super Script ONE-STEP RT-PCR System''® (Gibco). The enzimatic amplification reaction run in 2% agarose gel electrophoresis stained with ethidium bromide, revealed 123 bp products in 3 (23%) of the 13 lots of samples collected during the summer of 1998. One of these three samples was positive for SRSV particles by Immune Electron Microscopy (IEM). These 3 products were classified in the Genogroup G2 (Snow Mountain and others viruses). The application of this methodology made it possible to detected, in a molecular basis, the first cases of SRSVs in environmentally contaminated oysters in Brazil.
 
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Data de Publicação
2005-04-05
 
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