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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.25.2013.tde-22112013-111350
Documento
Autor
Nome completo
Alessandra Cury Machado
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Bauru, 2013
Orientador
Banca examinadora
Oliveira, Rodrigo Cardoso de (Presidente)
Bosqueiro, Anne Lígia Dokkedal
Carneiro, Everdan
Duarte, Marco Antonio Hungaro
Sant'Ana, Adriana Campos Passanezi
Título em português
Caracterização do extrato de aroeira (Myracrodruon urundeuva) e seu efeito sobre a viabilidade de fibroblastos gengivais humanos
Palavras-chave em português
Myracrodruon urundeuva
Fitoterápicos
MTT
Plantas medicinais
Vermelho neutro
Viabilidade celular
Resumo em português
A aroeira (Myracrodruon urundeuva) é uma árvore cujas folhas vem sendo estudadas com fins terapêuticos na medicina e odontologia por apresentar potencial antiinflamatório e antimicrobiano, além de favorecer o processo de reparo e cicatrização. O objetivo do trabalho foi caracterizar quimicamente o extrato de aroeira e avaliar seu efeito sobre fibroblastos gengivais humanos. Foi realizado a caracterização química da aroeira por meio do processo de triagem cromatográfica que consistiu na coleta das folhas sadias, maceração em metanol (MeOH) 80%, partição entre os solventes hexano, acetato de etila (AcOEt) e n-butanol (n-(BuOH)) Em seguida, realizaram-se análises dos compostos químicos em cromatografia liquida de alta eficiência acoplado a detector de arranjo de fotodiodo HPLC-PAD, análises por espectrometria de massas MS e cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS). Posteriormente foi realizada a análise de citotoxicidade do extrato hidroalcoólico de aroeira em fibroblastos gengivais humanos (linhagem FGH). Para a realização dos experimentos foram plaqueadas 2x103 células/poço em placas de 96 poços. O meio de cultivo foi substituído por meio de cultura de Eagle modificado por Dullbecco complementado por 10% soro fetal bovino (SFB) em diferentes concentrações do extrato hidroalcoólico de aroeira (extrato bruto; 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000 e controle). As análises de viabilidade foram feitas nos tempos experimentais de 24, 48, 72 e 96 horas, por meio dos testes de redução do MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazólio), captação do vermelho neutro e coloração pelo cristal violeta. A estatística foi realizada em análise de variância de 2 critérios seguido de uma análise de teste Tukey (p<0,05). Os compostos encontrados no extrato foram os derivados de ácido gálico, galotaninos, além de flavonoides. Para a redução do MTT os resultados mostraram uma ligeira oscilação da absorbância em todos os grupos nos períodos experimentais. Destaque para as diluições de 1:100, 1:1000 e 1:10000 que apresentaram, em geral para todos os períodos, os maiores valores; enquanto os grupos de extrato bruto e diluição 1:10 apresentaram valores inferiores aos outros grupos (p<0,05). Na análise da captação do vermelho neutro também houve uma leve oscilação dos valores de absorbância, no entanto os valores obtidos para o grupo do extrato bruto foram os menores em todos os períodos estudados (p<0,05). Enquanto os grupos controle e de diluições de 1:100, 1:1000 e 1:10000 apresentaram valores semelhantes sem diferença significante (p>0,05). Para o teste do cristal violeta, os resultados encontrados seguiram o mesmo padrão do vermelho neutro: valores de absorbância menores nos grupos do extrato bruto e 1:10, ao contrário dos outros grupos que apresentaram valores maiores (p<0,05). Em vista dos resultados, podemos concluir que o extrato metanólico de aroeira apresenta em sua composição taninos, flavonóides e derivados de ácido gálico e de galotaninos. Além disso, o extrato de aroeira é capaz de modular a viabilidade de fibroblastos gengivais humanos de maneira dose-dependente.
Palavras-chave em inglês
Myracrodruon urundeuva
Celular viability
Medicinal plants
MTT
Neutral red
Phytotherapeutic
Resumo em inglês
Aroeira (M. urundeuva) is a tree whose leaves have been studied with therapeutic purpose in dentistry and medicine, due it antimicrobial and antinflamatory potencial protect, besides the repair and cicatrization processes. The aim of the study was characterize the aroeiras extract and evaluate effect over human gingival fibroblast. The aroeiras characterization was realized by means of chromatography screenuy, process that consists in healthy leaves maceration in 80% MeOH, partition in the BuOH, AcOEt and hexanes solvents. Next, the chemicals compounds were analysed in High Performance Liquide Chromatography-Photo Diode Array (HPLC-PAD), Liquide Chromatography Mass Spectrometry (LCMS) and Mass Spectrometry (MSs). Subsequently was realized the citotoxicitys analysis from the aroeira hidroalcooholic extract in human gingival fibroblast (FGH lineage). For the experiments realization was platted 2x103 cels/well in 96 wells plate. The cultives mean was substituted for Eagles means culture changed for complemented Dullbeco for 10% bovine fetal serum in aroeiras hidroalcooholic extracts concentrations different (brute extract, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000). The viability analysis was carried out in experimental times 24, 48, 72 and 96 hours, by means of MTT reductions test (brometo3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazolio), neutral red captation and violet crystal). The statistics were performed for analysis of variance in 2 criteria continue with a Tukey test analysis (p<0.05). The founded compounds in the extract was the galic acid, gallotanine linked to glucose, besides flavonoids. For the MTTs reduction the results display an absorbance oscillation lightness in all the groups in experimental periods. Distinction for the control group and 1:100, 1:1000 and 1:10000 dilution, that present, by and large, for all the periods, the biggest valuable, while the brute extract group and 1:10 dilution present valuable lower to the others groups (p<0.05). In neutral red is caption analysis there was an absorbants values light oscillation too, despite this, the gotten values for the brute extracts group was smaller in all the studied periods (p<0.05). While the control group and the 1:100, 1:1000 and 1:10000 dilution presented similar values without significant difference (p>0.05). In view of the results, conclude the aroeiras methanolic extract present in your composition flavonoids and gallotanine, and galic acid derivates. Then, the aroeiras extracts is able to human gingival fibroblasts viable modulate dependent dose way.
 
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Data de Publicação
2013-11-25
 
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