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Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.17.2019.tde-30052019-163658
Documento
Autor
Nome completo
Marcela Dambrowski dos Santos
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2018
Orientador
Banca examinadora
Simões, Aguinaldo Luiz (Presidente)
Muniz, Yara Costa Netto
Fracasso, Nádia Carolina de Aguiar
Manfrin, Maura Helena
Silva Junior, Wilson Araújo da
Título em português
Marcadores Inserção/Deleção na quantificação de quimerismo hematopoiético
Palavras-chave em português
InDel
qPCR
Quantificação
TCTH
TMO
Resumo em português
Introdução: Métodos quantitativos sensíveis e acurados para monitorar o quimerismo hematopoiético após Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH) são necessários para verificar o sucesso do enxerto, uma vez que os resultados influenciam a abordagem terapêutica. Método: A técnica de detecção de DNA baseada em primers inserção-específicos de marcadores genéticos do tipo InDel (Inserção/Deleção) foi avaliada quanto a sua utilidade em quantificar quimerismo em amostras de DNA em baixa concentração, em PCR em Tempo Real (qPCR). Para isso, amostras de DNA de dez pacientes submetidos a Transplante de Medula Óssea (TMO) foram analisados para quantificar a concentração de DNA residual em diferentes períodos pós-transplante. Os resultados obtidos pela InDelqPCR foram comparados com a evolução clínica descrita nos prontuários. Resultados: As quantificações do DNA residual variaram de 0,021 ng/µL a 11,71 ng/µL, correspondendo a fração de 0,065% a 40,6% do DNA total presente na amostra. Os resultados obtidos (presença ou ausência do alelo inserção) foram condizentes com a evolução clínica dos pacientes, em alguns casos, evidenciando quimerismo prévio ao relatado nos prontuários. Conclusão: Nossos dados demonstram a utilidade do método InDel-qPCR, baseada em primers inserçãoespecíficos, no monitoramento de quimerismo hematopoiético.
Título em inglês
Insertion/Deletion markers for quantification of hematopoietic chimerism by
Palavras-chave em inglês
BMT
HSCT
InDel
qPCR
Quantification
Resumo em inglês
Introduction: Sensitive and accurate quantitative methods to monitor hematopoietic chimerism after Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) are necessary to evaluate engraftment since the results influence a therapeutic approach. Method: DNA detection technique based on insert-specific primers for Insertion/Deletion polymorphism (InDel) was evaluated for chimerism quantification of samples with low amounts of DNA, by quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR). Samples of patients undergoing Bone Marrow Transplantation (BMT) collected at different post-transplantation times were analyzed to quantify the residual DNA concentration. Then, the results found using InDel-qPCR were compared to the medical records. Results: DNA quantifications ranged from 0.021 ng/?L to 11.71 ng/?L, corresponding to a fraction of 0.065% to 40.6% of the total DNA. Our results, in some cases, shows chimerism presence previously to that reported in the medical records. Conclusion: Our data demonstrate the usefulness of the InDelqPCR method based on insertion-specific primers in the monitoring of hematopoietic chimerism.
 
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Data de Publicação
2019-08-16
 
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