Considerando que os meios de cultura e as condições de incubação são os principais fatores para o sucesso do primo isolamento, além do método de descontaminação, quatro meios de cultura e três condições de incubação foram investigados. Noventa e sete amostras de lesões granulomatosas foram submetidas ao método de descontaminação com cloreto de 1-hexadecilpiridinio (HPC) a 1,5%, e semeadas em dois meios a base de ovo, Stonebrink e Löwenstein-Jensen com piruvato de sódio, e em dois meios a base de ágar, B83 e Middlebrook 7H11. Cada meio foi incubado a 37ºC por 90 dias em três condições de incubação, atmosfera com 10% de CO₂, atmosfera normal e atmosfera com suposta tensão de CO₂ obtida pela queima do algodão hidrófobo e fechamento do tubo com rolha de cortiça. O tipo de condição de incubação utilizado teve influência nos meios a base de ovo apenas no inicio da incubação (30 dias), mas nenhuma nos meios a base de ágar. A incubação em atmosfera com 10% de CO₂ diminuiu o tempo de aparecimento da primeira colônia e aumentou o número de UFC. O meio B83 foi mais rápido no aparecimento das colônias e teve o maior sucesso de isolamento aos 30 dias, mas não houve diferença com os meios Stonebrink e Löwenstein-Jensen com piruvato, no sucesso de isolamento e número de UFC aos 60 e 90 dias. De acordo com os dados, em sete oportunidades houve isolamento de M. bovis apenas no meio de Stonebrink e em quatro apenas no B83, assim, sugere-se a utilização desses dois meios de cultura em paralelo, incubados em atmosfera com acréscimo de CO₂

Considering that the culture media and the incubation conditions are the main factors for the success of primary isolation, besides the decontamination procedure, four culture media and three incubation conditions were investigated. Ninety-seven samples of granulommatous lesions were submitted to the decontamination procedure by 1-hexadecylpyridinium chloride at 1,5% w/v, and inoculated on two egg-based media, Stonebrink and Löwenstein-Jensen with sodium pyruvate, and two agar-based media, B83 and Middlebrook 7H11. Each medium was incubated at 37ºC for 90 days in three incubation conditions, in air containing 10% CO₂, in air, and in air with a supposed higher CO₂ tension created by burning the hydrophobic cotton used to close the tubes and subsequently closing with a cork. The type of incubation condition used had influence on the egg-based media only at the beginning of incubation (30 days), but none on the agar-based media. The incubation in air containing 10% CO₂ decreased the time to first appearance of colonies and increased the number of colonies. B83 medium showed a faster growth and detected more isolates at 30 days of incubation. However, there was no difference between B83, Stonebrink and Löwenstein-Jensen with pyruvate at 60 and 90 days of incubation. According to the data, seven M. bovis isolates grew only on Stonebrink and four only on B83, therefore, the use of both media, in parallel, incubated in air containing CO₂ is suggested.