Toda a relevância que onça-pintada e a onça-parda, como predadores topo de cadeia, têm para a fauna brasileira é incompatível com a carência de trabalhos relacionados à biotecnologia reprodutiva em fêmeas destas espécies. Visando suprir parte desta carência, este trabalho teve como objetivo descrever o comportamento copulatório da onça-pintada; padronizar a técnica de aspiração folicular por laparoscopia em onçaspardas e pintadas; avaliar a qualidade e quantidade de oócitos de onças-pardas e pintadas maturados in vivo e in vitro; avaliar a viabilidade de oócitos desvitrificados; produzir de embriões in vitro de onças-pardas e pintadas a partir de oócitos maturados in vivo e in vitro; e avaliar a ovulação espontânea em onças-pintadas mantidas em cativeiro. Informações básicas sobre o comportamento reprodutivo das onçaspintadas são de extrema importância para o manejo, desenvolvimento de projetos de reprodução assistida e conservação. O comportamento copulatório da onça-pintada foi descrito de forma qualitativa, a partir dos primeiros sinais de proceptividade feminina e até a finalização da cópula. Descobrimos que quase metade dos eventos de copulação de Panthera onca pode ocorrer sem penetração peniana e, nesses casos, acredita-se que a ejaculação não ocorra. Várias cópulas ocorreram durante o estro feminino. Consistente com os pensamentos relatados por outros, acreditamos que esse comportamento pode ser necessário para promover múltiplas ovulações e para garantir um número suficiente de penetrações penianas bem-sucedidas com a ejaculação, garantindo assim que um número adequado de espermatozoides fertilizantes normais seja depositado na vagina. A LOPU é um procedimento seguro para obtenção de oócitos de boa qualidade visando a multiplicação de felinos selvagens como parte de estratégias de conservação, especificamente onças-pardas e onças-pintadas, que são consideradas vulneráveis no Brasil. Protocolos utilizando eCG para superestimulação ovariana são eficientes em onças-pardas e onças-pintadas, assim como a indução da ovulação nestas espécies com a utilização do hCG. A vitrificação e desvitrificação dos oócitos se mostraram eficientes, obtendo 86,4% estruturas desvitrificados com êxito em relação à avaliação morfológica. É possível a fertilização in vitro de oócitos de onças-pintadas maturados in vivo, porém novos trabalhos são necessários para a maturação in vitro dos oócitos desta espécie e de onças-pardas. A onça-pintada apresenta ovulação induzida por estímulo sensorial e não uma ovulação espontânea. Pelas dificuldades de trabalho com estes animais, não temos nenhum trabalho que defina a situação (ovulação induzida por estímulo sensorial vs. ovulação espontânea) em forma contundente. A ovulação induzida por estímulo sensorial resulta em um reflexo neurológico que resulta na liberação de GnRH pelo estímulo do hipotálamo médio-basal e subsequentes liberações de LH pela hipófise anterior, induzindo a ovulação.