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Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.10.2003.tde-25092006-104634
Document
Author
Full name
Eduardo Antunes Dias
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2003
Supervisor
Committee
Oliveira, Claudio Alvarenga de (President)
Guimarães, Marcelo Alcindo de Barros Vaz
Madeira, Alda Maria Backx Noronha
Title in Portuguese
Determinação do sexo de psitacídeos por radioimunoensaio (RIE) de esteróides sexuais e por reação em cadeia pela polimerase (PCR) a partir de excretas cloacais
Keywords in Portuguese
Excretas cloacais
PCR
Psitacídeos
Radioimunoensaio
Sexo
Abstract in Portuguese
Para o presente estudo, utilizaram-se amostras de excretas cloacais de 65 aves da família Psittacidae, previamente sexadas. Os andrógenos e estrógenos fecais foram extraídos com Tampão Fosfato Salino (PBS) e com uma solução PBS:Álcool Etílico (4:1) e a mensuração hormonal foi realizada em ?kits? comerciais para radioimunoensaio no Laboratório de Dosagens Hormonais (LDH) do Departamento de Reprodução Animal (VRA) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). O sexo de cada ave foi confirmado utilizando como parâmetro o intervalo de confiança (95%) da média dos valores transformados do fator Razão dos índices de Estrógenos e Andrógenos ou com o intervalo de confiança (95%) da média dos valores transformados dos índices do fator Andrógeno. As extrações de DNA de algumas amostras foram realizadas por meio de ?kits? comerciais e por meio de resinas no Laboratório de Biologia Molecular do Departamento de Patologia (VPT) - FMVZ/USP. O DNA foi amplificado pela técnica da PCR utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores específicos para a região que determina o sexo das aves. Também se avaliou o efeito da adição de células sanguíneas nas amostras. Setenta por cento das aves tiveram o sexo confirmado pela técnica do radioimunoensaio. A amplificação do produto na PCR somente ocorreu em amostras onde células sanguíneas foram adicionadas e o DNA extraído com um determinado ?kit? comercial. Os resultados encontrados demonstram a necessidade da realização de mais estudos para a determinação do sexo de aves monomórficas por meio de técnicas não invasivas. Validaram-se dois kits comerciais para a mensuração de metabólitos de hormônios esteróides em excretas cloacais de aves por radioimunoensaio.
Title in English
Psittacine sex determination by radioimunoassay (RIA) of sex steroids and by polimerase chain reaction (PCR) using fecal samples
Keywords in English
Feces
PCR
Psittacines
Radioimmunoassay
Sex
Abstract in English
For the current study, it were used fecal samples from 65 birds of Psittacine Family, previously sexed by PCR from blood cells. The fecal androgens and estrogens metabolites were extracted with PBS (Phosfate Buffer Saline) or PBS :Ethil Alchool (4:1) and measured by comercial radioimunoassay kits at the Hormonal Measurement Laboratory of the Department of Animal Reproduction of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny of the University of São Paulo. The sex determination of the birds were performed using the confidence interval (95%) for the mean of transformed values of estrogens/androgen rate or transformed androgens values. The fecal DNA extraction of some samples were performed using comercial kits or by resines at the Molecular Biology Laboratory of the Pathology Department of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny of the University of São Paulo. The DNA were amplified by PCR using specific primers for the target region of bird gene that express sex. Evaluation of the effect of blood cells adding on samples also had been done. 70% of birds had the sex confirmed by radioimunoassay. The amplification of PCR products occured only in samples added with blood cells and extracted by a specific comercial kit. The results showed that further studies for sex determination on monomorphic birds by non-invasive techniques are necessary. Two comercial kits were validated for the measurement of fecal steroid metabolites by radioimunoassay.
 
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Publishing Date
2007-04-12
 
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