• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.10.2005.tde-21092006-111358
Documento
Autor
Nome completo
Eneiva Carla Carvalho Celeghini
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2005
Orientador
Banca examinadora
Arruda, Rubens Paes de (Presidente)
Barbosa, Rogerio Taveira
Barnabe, Valquiria Hyppólito
Bicudo, Sony Dimas
Esper, Cesar Roberto
Título em português
Efeitos da criopreservação do sêmen bovino sobre as membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial e estrutura da cromatina dos espermatozóides utilizando sondas fluorescentes
Palavras-chave em português
Bovinos
Criopreservação
Espermatozóides
Mitocôndrias
Sondas fluorescentes
Resumo em português
A criopreservação, como já conhecido, causa danos da função celular podendo, com isso, apresentar redução da fertilidade. O desenvolvimento de técnicas para avaliar a viabilidade espermática, que visam aperfeiçoar o processo de avaliação seminal tem sido meta de muitas pesquisas. Este trabalho foi dividido em dois experimentos. O experimento 1 foi realizado para o desenvolvimento e validação de técnicas práticas e de alta repetibilidade para a avaliação simultânea da integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial de espermatozóides bovinos pela associação de sondas fluorescentes. O experimento 2 foi realizado para avaliar os efeitos que a criopreservação pode causar sobre a motilidade espermática, membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial (pela técnica desenvolvida no experimento 1) e estrutura da cromatina de espermatozóides bovinos frente a dois diluidores diferentes, bem como verificar a existência de correlações entre alterações nas membranas e características de motilidade em espermatozóides bovinos criopreservados. No experimento 1 as associações das sondas iodeto de propídio (PI, para avaliar integridade da membrana plasmática) e aglutinina de Pisum sativum conjugada a isotiocionato de fluoresceína (FITC-PSA, para avaliar a integridade acrossomal), foram divididas em quatro protocolos, nos quais foram testadas diferentes sondas para avaliar a função mitocondrial. Rodamina 123 (R123, protocolo 1), MitoTracker Green FM (MITO, protocolo 2), CMXRos ou MitoTracker red (protocolo 3) e no: iodeto de 5,5’,6,6’-tetracloro-1,1’,3,3’-tetraetilbenzimidazolilcarbocianina (JC-1, protocolo 4). Estes protocolos foram testados e validados. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância, teste de Fisher e à análise de regressão linear pelo programa Stat-View® (SAS Institute, Inc. 1998). O protocolo 1 não apresentou resultados satisfatórios, não sendo possível validar, enquanto, os protocolos 2, 3 e 4 foram validados e apresentaram resultados bastante consistentes. O protocolo 4 foi escolhido para a utilização no experimento 2. Para o experimento 2 foram realizadas sete colheitas de sêmen de oito touros puros da raça Simental. Após a colheita, o sêmen foi avaliado quanto ao volume, concentração, motilidade e vigor visualmente, motilidade por sistema computadorizado (CASA), características morfológicas por microscopia de interferência diferencial, integridade das membranas plasmática e acrossomal, função mitocondrial, pela associação de FITC-PSA, PI e JC-1, e integridade da estrutura da cromatina, pela técnica da acridina laranja. Após as análises, o sêmen foi dividido em duas alíquotas, sendo uma das alíquotas diluída com o diluidor Bioxcell® e a outra com o diluidor Botu-Bov®, envasado em palhetas e submetido a congelação com um sistema automatizado. Duas palhetas cada tratamento foram descongeladas e o sêmen foi avaliado quanto a motilidade e vigor visualmente, motilidade pelo CASA, características morfológicas, integridade das membranas plasmática e acrossomal, função mitocondrial e estrutura da cromatina. A análise estatística foi realizada utilizando-se o programa Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 1985), os dados foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey. Foram calculadas correlações lineares de Pearson. O nível de significância foi fixado em 5%. Foram observados efeitos da criopreservação e do diluidor sobre motilidade e vigor visual, motilidade pelo CASA, características morfológicas, integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial. De forma que, após a criopreservação houve aumento dos danos nas estruturas espermática e o diluidor Botu-Bov® apresentou a maioria das características melhores quando comparado ao diluidor Bioxcell®
Título em inglês
Effects of bovine semen cryopreservation on sperm plasmatic, acrosomal, and mitochondrial membranes and chromatin structure using fluorescent probes
Palavras-chave em inglês
Bovine
Cryopreservation
Fluorescents probes
Mitochondria
Spermatozoa
Resumo em inglês
The process of cryopreservation causes damages in the sperm cellular function which may lead to a reduction in fertility. New techniques to evaluate sperm viability may improve the process of semen evaluation. The present work was divided in two experiments. Experiment 1 aimed the development and validation of practical techniques with high repetibility for simultaneous evaluation of integrity of plasmatic and acrosomal membrane and mitochondrial function of bovine spermatozoa by the strategic association of fluorescent probes. Objective of experiment 2 was to validate the effects of cryopreservation using two differents diluents on sperm motility, plasmatic, acrosomal, mitochondrial membranes integrity and chromatin structure of bovine spermatozoa. A second objective was to verify the correlations between alterations in membranes and motility characteristics in cryopreserved bovine spermatozoa. In experiment 1 propidium iodide (PI, to evaluate plasmatic membrane integrity) and the Pisum sativum agglutinin conjugated with fluorescein isothicyonate- (FITC-PSA, to evaluate acrosomal integrity). Probes were associated to evaluate mitochondrial function in four protocols: Rhodamine 123 (R123, Protocol 1), MitoTracker Green FM (MITO, protocol 2), CMXRos or MitoTracker red (protocol 3), and 5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolyl carbocyanine iodide (JC-1, protocol 4). Results were submitted to analysis of variance, Fisher’s test and linear regression analysis by the program Stat-View® ( SAS Institute, Inc.1998). It was not possible to validate protocol 1, while the protocols 2, 3 and 4 were validated and showed consistent results. Protocol 4 was used in experiment 2. For experiment 2 seven ejaculates were collected from eight Simental bulls. Volume, concentration, motility and vigour of semen were evaluated subjectively, motility by computer system (CASA), morphological characteristics by differential interference microscopy, plasmatic and acrosomal membranes integrity and, mitochondrial function with FITC-PSA, PI and JC-1 association, and chromatin integrity by acridine orange technique. Then, semen was divided in two aliquots. One was diluted with Bioxcell® and the other with Botu-Bov® diluent, packaged in 0.5 mL straws and frozen using na automated system. Two straws of sêmen from each treatment were thawed and the semen parameter evaluated, as described above. The statistical analysis was performed using the Statistical Analysis System program (SAS Institute Inc., 1985). Data were submitted to analysis of variance and Tukey’s test. Pearson’s linear correlations were calculated. Cryopreservation increased damages in spermatic structures. Botu-Bov® diluent was better in preserve the motility and membrane integrity (P⁢0,05) when compared to Bioxcell® diluent
 
AVISO - A consulta a este documento fica condicionada na aceitação das seguintes condições de uso:
Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
Data de Publicação
2006-10-24
 
AVISO: O material descrito abaixo refere-se a trabalhos decorrentes desta tese ou dissertação. O conteúdo desses trabalhos é de inteira responsabilidade do autor da tese ou dissertação.
  • ARRUDA, R. P., et al. Aspects related to the technique and the utilization of sexed semen in vivo and in vitro. Animal Reproduction, 2012, vol. 9, p. 345-353.
  • de Andrade, André Furugen Cesar, et al. Post-thaw addition of seminal plasma reduces tyrosine phosphorylation on the surface of cryopreserved equine sperm, but does not reduce lipid peroxidation [doi:10.1016/j.theriogenology.2012.01.003]. Theriogenology [online], 2012, vol. 77, p. 1866-1872.e3.
  • FORERO-GONZALEZ, R. A., et al. Effects of bovine sperm cryopreservation using different freezing techniques and cryoprotective agents on plasma, acrosomal and mitochondrial membranes [doi:10.1111/j.1439-0272.2010.01154.x]. Andrologia (Berlin) [online], 2012, vol. 44, p. 154-159.
  • OLIVEIRA, L. Z., et al. AI, Semen quality and handling in bovine reproduction. Theriogenology Insight, 2012, vol. 2, p. 73-86.
  • OLIVEIRA, L. Z., et al. Assessment of field fertility and several in vitro sperm characteristics following the use of different Angus sires in a timed-AI program with suckled Nelore cows [doi:10.1016/j.livsci.2012.02.018]. Livestock Science [online], 2012, vol. 146, p. 38-46.
  • OLIVEIRA, L. Z., et al. Effects of discontinuous Percoll gradient centrifugation on the quality of bovine spermatozoa evaluated with computer-assisted semen analysis and fluorescent probes association [doi:10.1111/j.1439-0272.2010.01096.x]. Andrologia (Berlin) [online], 2012, vol. 44, p. 9-15.
  • Oliveira, Letícia Zoccolaro, et al. Assessment of in vitro sperm characteristics and their importance in the prediction of conception rate in a bovine timed-AI program [doi:10.1016/j.anireprosci.2013.01.010]. Animal Reproduction Science [online], 2013, vol. 137, p. 145-155.
  • SOARES, MARCIO PEREIRA, et al. Effect of cis-9,trans-11 and trans-10,cis-12 isomers of conjugated linoleic acid on the integrity and functionality of cryopreserved bovine spermatozoa [doi:10.1016/j.cryobiol.2013.05.003]. Cryobiology [online], 2013, vol. 67, p. 102-105.
  • ALONSO, M. A., et al. Efeito da aplicação da hcG em diferentes dias do ciclo estral sobre o fluxo sanguíneo uterino e ovariano e tonus uterino e cervical. In IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal, Pirassununga, 2012. IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal da FMVZ/USP.., 2012. Resumo.
  • ALONSO, M. A., et al. Effect of hCG application in different days of estrous cycle on uterine and ovarian blood flow and uterine and cervical tone in mares. In 26th Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society - SBTE, Foz do Iguaçu-PR, 2012. Proceedings of the 26th Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society. : Brazilian College of Animal Reproduction, 2012. Abstract.
  • ARRUDA, R. P., et al. Nutracêuticos na reprodução de garanhões. In V Simpósio Internacional do Cavalo Atleta., Belo Horizonte, 2011. Revista Veterinária e Zootecnia em Minas (V&Z em Minas).., 2011.
  • CARVALHO, H. F., et al. Efeitos de diluidores e curva de congelação sobre as características de motilidade, membranas espermáticas e fragmentação do DNA no sêmen de equino sexado pela técnica de citometria de fluxo. In IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal, Pirassununga, 2012. IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal da FMVZ/USP.., 2012. Resumo.
  • LEMES, K. M., et al. Avaliação da dinâmica ovariana, características uterinas, fluxo sanguíneo uterino e ovariano e concentrações plasmáticas de progesterona em éguas no período pós-parto. In IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal, Pirassununga, 2012. IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal., 2012. Resumo.
  • OLIVEIRA, B. M. M., et al. Efeitos da inseminação artificial sobre a vascularização uterina de bovinos. In XIX Congresso Brasileiro de Reprodução Animal, Belo Horizonte, 2011. Revista Brasileira de Rerprodução Animal., 2011. Resumo.
  • SILVA, D. F., et al. Efeito da inibição da enzima óxido nítrico sintase (NOS) e da eliminação do óxido nítrico (NO) nos padrões da motilidade e integridade de membrana plasmática e acrossomal do espermatozoide equino criopreservado. In IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal, Pirassununga, 2012. IV Simpósio de Pesquisa e Pós Graduação do Departamento de Reprodução Animal da FMVZ/USP.., 2012. Resumo.
  • SILVA, D. F., et al. Effect of nitric oxide enzyme (NOS) inhibition and nitric oxide (NO) elimination on motility patterns and plasma membrane integrity and acrossome reaction of cryopreserved equine sperm. In 26th Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society - SBTE, Foz do Iguaçu-PR, 2012. Proceedings of the 26th Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society. : Brazilian College of Animal Reproduction, 2012. Abstract.
  • THOME, H. E., et al. Comparação de técnicas para avaliar a citologia endometrial em bovinos após a inseminação artificial. In XIX Congresso Brasileiro de Reprodução Animal, Belo Horizonte, 2011. Revista Brasileira de Rerprodução Animal., 2011. Resumo.
  • Zoccolaro, Leticia, et al. The Importance of Semen Quality in AI Programs and Advances in Laboratory Analyses for Semen Characteristics Assessment [doi:10.5772/52022]. In . Success in Artificial Insemination - Quality of Semen and Diagnostics Employed [online]. Organizador. Rijeka, 2013{Volume}, p. 1.http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-21092006-111358/
Todos os direitos da tese/dissertação são de seus autores
CeTI-SC/STI
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP. Copyright © 2001-2024. Todos os direitos reservados.