• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.10.2007.tde-20082007-135013
Documento
Autor
Nome completo
Cláudia Fernandes Raphael
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2007
Orientador
Banca examinadora
Arruda, Rubens Paes de (Presidente)
Papa, Frederico Ozanam
Visintin, José Antonio
Título em português
Efeitos da centrifugação nas características de movimento, integridade e peroxidação lipídica das membranas do espermatozóide eqüino refrigerado
Palavras-chave em português
Centrifugação
Eqüinos
Membranas
Peroxidação
Sêmen refrigerado
Resumo em português
O sêmen eqüino é muito utilizado na forma refrigerada, porém, para alguns garanhões, a longevidade espermática é baixa. Durante a refrigeração o espermatozóide pode ser afetado por vários fatores, que podem causar a perda da integridade da membrana plasmática, danos no acrossomo e disfunções mitocondriais, resultando em perda irreversível de motilidade e capacidade fecundante. A composição e concentração do plasma seminal podem causar efeitos deletérios ao espermatozóide, sendo a centrifugação do sêmen uma alternativa para minimizar estes efeitos. Este experimento foi realizado para verificar o efeito da centrifugação nas características de movimento, integridade e peroxidação lipídica das membranas do espermatozóide eqüino refrigerado a 5°C por até 72h. Foram realizadas cinco colheitas de sêmen de quatro garanhões. O sêmen foi avaliado quanto ao volume e concentração, e em seguida dividido em dois tratamentos, sem centrifugação (S) e centrifugado (C) (300g/10min). Ambos foram diluídos na concentração final de 30 x106 eptz/mL em diluidor a base de leite desnatado e então refrigerados. Foram analisadas as características do movimento espermático (CASA), morfologia espermática (DIC), integridade das membranas plasmática e acrossomal (PI/FITC-PSA), potencial de membrana mitocondrial (JC-1) e peroxidação lipídica das membranas (C11-BODIPY581/591), sendo estas três últimas análises por citometria de fluxo. As análises foram realizadas no tempo 0 e 24, 48 e 72 horas após a refrigeração. O delineamento experimental foi em blocos generalizados adicionado do fator medidas repetidas no tempo. Os dados foram analisados pelo programa SAS, submetidos à análise de variância e às interações determinadas pelo teste de Greenhouse-Geisser ao nível de 5% de significância. O espermatozóide do sêmen centrifugado apresentou valores médios maiores de motilidade total e progressiva, ALH, STR e LIN (P<0,05), porém os valores das velocidades e BCF foram menores (P<0,05). Houve efeito do tempo nas características de movimento espermático (P<0,05), exceto para STR. Não houve efeito da centrifugação e nem do tempo quanto às características morfológicas dos espermatozóides refrigerados, esta só diferiu entre os garanhões (P<0,05). Por sua vez, a integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial espermáticas foram maiores nos sêmen centrifugado (P<0,05) e suas porcentagens decresceram com o tempo (P<0,05). A peroxidação lipídica da membrana do espermatozóide refrigerado aumentou somente nas primeiras 24h (P<0,05) e não foi influenciada pela centrifugação. Conclui-se que a centrifugação e a retirada do plasma seminal melhoram a qualidade do sêmen refrigerado eqüino, principalmente em garanhões com baixa longevidade, sendo esta influenciada pelas características iniciais da morfologia espermática. Ainda, tempo de refrigeração induz a um declínio da qualidade seminal. E, por fim, a peroxidação lipídica da membrana do espermatozóide parece não ser a principal causa de alterações da integridade das membranas e do potencial de membrana mitocondrial durante a refrigeração do sêmen eqüino.
Título em inglês
Effects of centrifugation on motion characteristics, membranes integrity and lipid peroxidation of equine cooled spermatozoon
Palavras-chave em inglês
Centrifugation
Cooled Semen
Equine
Membranes
Peroxidation
Resumo em inglês
Equine cooled semen is frequently used, although the longevity for some stallions is low. During the cooling process the spermatozoon can be affected by several factors that can cause loss of plasma membrane integrity, acrosomal damage and mitochondrial dysfunctions, resulting in irreversible loss of motility and fertilizing capacity. The composition and concentration of seminal plasma could cause harmful effects to the sperm, being semen centrifugation an alternative to minimize these effects. This experiment was designed to verify the effects of the centrifugation in motion characteristics, membranes integrity and lipid peroxidation of cooled equine sperm to 5°C until 72 hours. Five ejaculates from four stallions were collected. The semen was evaluated for volume and concentration, then split in two treatments, no centrifugation (N) and with centrifugation (W) (300g/10min). Both were diluted in the final concentration 30 x106 spermatozoa/mL in a skin milk extender and then cooled. The following analyses were performed: the sperm motion characteristics (CASA), morphology (DIC), plasma and acrosomal membranes integrity (PI/FITC-PSA), mitochondrial membrane potential (JC-1) and membrane lipid peroxidation (C11-BODIPY581/591), the last three analyses were assessed in flow citometry. The analyses were performed in time 0 and 24, 48 and 72 hours after cooling. The experimental design was random blocks with repeated-measures. The data were analyzed by the SAS program, submitted to analysis of variance and the interactions by the test of Greenhouse-Geisser at the level of 5% of significance. The values were larger in W semen for total and progressive motility, ALH, STR and LIN (P<0,05), however the values of the three types of speed and BCF were smaller (P<0,05). There was effect of time in the motion characteristics of sperm (P<0,05), except for STR. There was not any effect of centrifugation and time for the morphologic characteristics of cooled spermatozoa, that only differed among stallions (P<0,05). On the other hand, the sperm integrity of plasma and acrosomal membranes and the potential of mitochondrial membrane were larger in W semen (P<0,05) and their percentages decreased within time (P<0,05). The membrane lipidic peroxidation of the cooled sperm only increased in the first 24 hours (P<0,05) and it was not influenced by centrifugation. In conclusion, the centrifugation and withdrawal of the seminal plasma improve semen quality of the cooled equine sperm, mainly in stallions with low longevity, which is influenced by the initials characteristics of sperm morphology. Moreover, time of cooling induces a decline of seminal quality. Finally, the membrane lipidic peroxidation of the cooled sperm seems not to be the main cause of alterations in the sperm integrity of plasma and acrosomal membranes and the potential of mitochondrial membrane during the cooling of equine semen.
 
AVISO - A consulta a este documento fica condicionada na aceitação das seguintes condições de uso:
Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
Data de Publicação
2007-08-22
 
AVISO: O material descrito abaixo refere-se a trabalhos decorrentes desta tese ou dissertação. O conteúdo desses trabalhos é de inteira responsabilidade do autor da tese ou dissertação.
  • ANDRADE, A. F. C., et al. Fluorescent stain method for the simultaneous determination of mitochondrial potential and integrity of plasma and acrosomal membranes in boar sperm [doi:10.1111/j.1439-0531.2006.00751.x]. Reproduction in Domestic Animals (1990) [online], 2007, vol. 42, p. 190-194.
  • ARRUDA, R. P., et al. Biotécnicas aplicadas à avaliação do potencial de fertilidade do sêmen eqüino. Revista Brasileira de Reprodução Animal [online], 2007, vol. 31, p. 8-16. Dispon?vel em: http://www.cbra.org.br.
  • ARRUDA, R. P., et al. Importance of semen quality in fixed-time artificial insemination and embryo transfer program. Acta Scientiae Veterinariae [online], 2005, vol. 33, p. 145-150. Available from: http://www.ufrgs.br/favet/index.htm.
  • BARUSELLI, P. S., et al. Sêmen sexado: inseminação artificial e transferência de embriões. Revista Brasileira de Reprodução Animal [online], 2007, vol. 31, p. 374-381. Dispon?vel em: http://www.cbra.org.br.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Damage assessment of the equine sperm membranes by fluorimetric technique [doi:10.1590/S1516-89132010000600004]. Brazilian Archives of Biology and Technology [online], 2010, vol. 53, p. 1285-1292.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Effects that bovine sperm cryopresrvation using two different extenders has on sperm membranes and chromatin [doi:10.1016/j.anireprosci.2007.02.001]. Animal Reproduction Science [online], 2008, vol. 104, p. 119-131.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Practical Techniques for Bovine Sperm Simultaneous Fluorimetric Assessment of Plasma, Acrosomal and Mitochondrial Membranes [doi:10.1111/j.1439-0531.2006.00810.x]. Reproduction in Domestic Animals (1990) [online], 2007, vol. 42, p. 479-488.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Simultaneous assessment of plasmatic, acrosomal, and mitochondrial membranes in ram sperm by fluorescent probes [doi:10.1590/S0102-09352010000300006]. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia [online], 2010, vol. 62, p. 536-543.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Utilization of fluorescent probe association for simultaneous assessment of plasmatic, acrosomal, and mitochondrial membranes of rooster spermatozoa [doi:10.1590/S1516-635X2007000300001]. Revista Brasileira de Ciência Avícola / Brazilian Journal of Poultry Science [online], 2007, vol. 9, p. 143-149.
  • FORERO-GONZALEZ, R. A., et al. Effects of bovine sperm cryopreservation using different freezing techniques and cryoprotective agents on plasma, acrosomal and mitochondrial membranes [doi:10.1111/j.1439-0272.2010.01154.x]. Andrologia (Berlin) [online], 2012, vol. 44, p. 154-159.
  • NASCIMENTO, J., et al. Effects of Sperm Concentration and Straw Volume on Motion Characteristics and Plasma, Acrosomal, and Mitochondrial Membranes of Equine Cryopreserved Spermatozoa [doi:10.1016/j.jevs.2008.04.010]. Journal of Equine Veterinary Science [online], 2008, vol. 28, p. 351-358.
  • ANDRADE, A. F. C., et al. Effects of seminal plasma adding in motility maintenance on cryopreserved equine spermatozoa. In XXI Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Costa do Sauípe, 2007. Acta Scientiae Veterinariae.Porto Alegre : UFRG, 2007. Resumo. Dispon?vel em: http://www.ufrgs.br/favet/revista.
  • ANDRADE, A. F. C., et al. Fluorescent stain method for the simultaneous determination of mitochondrial potential and integrity of plasma and acrosomal membranes in boar sperm. In XIII Congresso da ABRAVES, Florianópolis, 2007. Anais do XIII Congresso da ABRAVES., 2007. Resumo.
  • ANDRADE, A. F. C., et al. Integrity of the plasma and acrosomal membranes evaluated by flow cytometry: What is the effect of addition of seminal plasma on these characteristics?. In XXI Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Costa do Sauípe, 2007. Acta Scientiae Veterinariae.Porto Alegre : UFRGS, 2007. . : http://www.ufrgs.br/favet/revista.
  • ANDRADE, A. F. C., et al. Seminal plasma reduce acrosome reaction in post-thawed equine spermatozoa. In Simpósio Internacional de Biologia e Reprodução Animal, Belo Horizonte, 2006. Animal Reproduction., 2006. Resumo.
  • ARRUDA, R. P., et al. Biotécnicas Aplicadas a la Criopreservacion y Evaluacion de Sêmen Equino. In V Seminário Internacional de Reproducción en Grandes Animales, Bogotá, 2006. Anais do V Seminário Internacional de Reproducción en Grandes Animales., 2006.
  • ARRUDA, R. P., et al. Biotécnicas Aplicadas a la Evaluación de Sêmen Criopreservado Bovino. In V Seminário Internacional de Reproduccion en Grandes Animales, Bogotá, 2006. Anais do V Seminário Internacional de Reproduccion en Grandes Animales., 2006.
  • ARRUDA, R. P., et al. Efeitos da criopreservação usando diferentes técnicas de congelação e crioprotetores sobre as membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial do espermatozóide bovino. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • ARRUDA, R. P., et al. Effects of Addition of Seminal Plasma on Lifespan of Frozen Thawed Equine Spermatozoa. In 5 th International Symposium on Stallion Reproduction, Gramado, 2008. Animal Reproduction Science. : Elsevier, 2008. Abstract.
  • ARRUDA, R. P., et al. Importância da qualidade do sêmen em programas de IATF e TETF. In 1º Simpósio Internacional de Reprodução Animal Aplicada, Londrina/PR, 2004. Biotecnologia da Reprodução em Bovinos., 2004.
  • ARRUDA, R. P., et al. Importância da qualidade do sêmen em programas de IATF e TETF. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • ARRUDA, R. P., et al. Influência da qualidade do sêmen nos resultados de prenhez em programas de IATF e TETF. In 2º Simpósio Internacional de Reprodução Animal Aplicada, Londrina, 2006. Biotecnologia da Reprodução em Bovinos., 2006.
  • ARRUDA, R. P., et al. Manipulação e uso do sêmen transportado refrigerado de garanhões. In II Simpósio de Equideocultura (SIMEQ), Viçosa, 2009. Anais do II Simpósio de Equideocultura (SIMEQ)., 2009.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Efeitos da criopreservação e do diluidor sobre a motilidade do sêmen bovino. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis/RJ, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Efeitos da criopreservação e do diluidor sobre o sêmen bovino quanto às membranas plasmática, acrossomal e função mitocondrial. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Rapid technique for simultaneous evaluation of the plasma, acrosomal and mitochondrial membranes of ram spermatozoa. In Simpósio Internacional de Biologia e Reprodução Animal, Belo Horizonte, 2006. Animal Reproduction., 2006. Resumo.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Simultaneous evaluation of the plasmatic, acrosomal and mitochondrial membranes in equine spermatozoa. In VX Internacional Congress of Animal Reproduction, Porto Alegre/BA, 2004. Internacional Congress of Animal Reproduction., 2004. Resumo.
  • CELEGHINI, E. C. C., et al. Uso de CMXROS e JC-1 na avaliação da função mitocondrial, associadas a sondas fluorescentes para avaliação da membrana plasmática e acrossomal em espermatozóides bovinos. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis/RJ, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • GARCIA, A. R., et al. Efeitos da somatotropina recombinante bovina sobre a integridade da cromatina de espermatozóides bovinos. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis/RJ, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • GARCIA, A. R., et al. Uso da microscopia de epifluorescência como técnica auxiliar à análise morfológica convencional de espermatozóides bovinos. In XVI Congresso Brasileiro de Reprodução Animal, Goiânia/GO, 2005. Congresso Brasileiro de Reprodução Animal., 2005. Resumo.
  • NASCIMENTO, J., et al. Avaliação da integridade das membranas plasmática, acrossomal e potencial de membrana mitocondrial em diferentes concentrações e volumes de espermatozóides criopreservados eqüino. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis/RJ, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • NASCIMENTO, J., et al. Efeitos da concentração espermática e volume da palheta nos caracteres de movimento de espermatozóides criopreservados eqüino avaliados pelo sistema computadorizado - CASA. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • NASCIMENTO, J., et al. Effects of Spermatic Concentration and Straw Volume in Motion Caracteristics of Equine Cryopreserved Spermatozoa Evaluated by Computer System-CASA. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Abstract.
  • NASCIMENTO, J., et al. Evaluation of Plasmatic and Acrsomal Membranes Integrity and Mitochondrial Membrane Potential on Different Concentrations and Volumes of Equine Cryopreserved Spermatozoa. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra do Reis, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Abstract.
  • RAPHAEL, C. F., et al. Effect of centrifugation in the maintenance of the motility of equine cooled spermatozoa at 5ºC until 72 hours. In XXI Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Costa do Sauípe, 2007. Acta Scientiae Veterinariae.Porto Alegre : UFRG, 2007. Resumo. Dispon?vel em: http://www.ufrgs.br/favet/revista.
  • RAPHAEL, C. F., et al. Effects of Centrifugation on Membrane Integrity and Lipid Peroxidation of Equine Cooled Spermatozoa. In 5 th International Symposium on Stallion Reproduction, Gramado, 2008. Animal Reproduction Science. : Elsevier, 2008. Abstract.
  • RAPHAEL, C. F., et al. Effects of dietary supplementation with gamma-oryzanol on seminal characteristics of stallions. In Simpósio Internacional de Biologia e Reprodução Animal, Belo Horizonte, 2006. Animal Reproduction., 2006. Resumo.
  • RAPHAEL, C. F., et al. Influence of centrifugation in the plasma and acrosomal membranes integrity and mitochondrial membrane potential of equine cooled spermatozoa at 5ºC until 72 hs. In XXI Reunião da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Costa do Sauípe, 2007. Acta Scientiae Veterinariae.Porto Alegre : UFRG, 2007. Resumo. Dispon?vel em: http://www.ufrgs.br/favet/revista.
  • SOUZA, L. W. O., et al. Efeitos da somatotropina sobre características seminais de bos taurus taurus sob condições de estresse testicular térmico. In XIX Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Angra dos Reis/RJ, 2005. Acta Scientiae Veterinariae., 2005. Resumo.
  • TANNO, P. H., et al. Estudo das Alterações Morfo-Funcionais de Espermatozóides Bovinos Submetidos à Sexagem pela Técnica de Citometria de Fluxo. In II Simpósio de Pesquisa e Pós-Graduação do Departamento de Reprodução Animal, Pirassununga, 2008. Anais do II Simpósio de Pesquisa e Pós-Graduação do Departamento de Reprodução Animal., 2008. Resumo.
Todos os direitos da tese/dissertação são de seus autores
Centro de Informática de São Carlos
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP. Copyright © 2001-2018. Todos os direitos reservados.