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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.10.2003.tde-14032005-160824
Documento
Autor
Nome completo
Maria Carolina Guido
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2003
Orientador
Banca examinadora
Ferreira Neto, José Soares (Presidente)
Barnabe, Valquíria Hyppolito
D'Angelo, Magali
Heinemann, Marcos Bryan
Richtzenhain, Leonardo José
Título em português
Detecção de DNA de Brucella abortus pela PCR em leite bubalino experimentalmente contaminado pela amostra 1119-3
Palavras-chave em português
Brucelose animal
Búfalos
Leite
PCR
Resumo em português
Com o objetivo de se aperfeiçoar a PCR para detecção de Brucella spp. em leite bubalino, foram estudados diferentes protocolos de extração de DNA em leite bubalino experimentalmente contaminado com Brucella abortus amostra 1119-3. Esses protocolos basearam-se na utilização de isotiocianato de guanidina, fervura e proteinase K, com algumas variações. O critério de avaliação utilizado foi a sensibilidade analítica. O protocolo utilizando fervura com filtração inicial da amostra em colchão de sacarose a 40% apresentou sensibilidade analítica de 103 UFC/ml. Os protocolos utilizando proteinase K para extração de DNA apresentaram sensibilidade analítica de 104 UFC/ml. A maior sensibilidade analítica (10 UFC/ml) e a melhor visualização do produto amplificado foram obtidos com a utilização de isotiocianato de guanidina com precipitação imediata em álcool sem adição de Tween 20 na lavagem inicial da amostra.
Título em inglês
Detection of Brucella abortus DNA by PCR in spiked buffalo milk with B. abortus strain 1119-3
Palavras-chave em inglês
Animal brucellosis
Buffalo
Milk
PCR
Resumo em inglês
To improve the PCR performance for detection of Brucella spp. in buffalo milk, different DNA extraction protocols were carried out in buffalo milk spiked with Brucella abortus strain 1119-3. These protocols were based on utilization of guanidine isothiocyanate, boil and proteinase K, with some variations. The analytical sensitivity was the evaluation criteria. Boiling with initial filtration of the sample through a solution of sacarosis 40% presented analytical sensitivity of 103 CFU/ml. The protocols based on proteinase K presented analytical sensitivity of 104 CFU/ml. The highest analytical sensitivity (10 CFU/ml) and best visualization of the amplified product were verified for the protocol using guanidine isothyocianate with immediate precipitation in alcohol without addition of Tween 20 in the initial sample wash.
 
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Data de Publicação
2007-06-28
 
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